别藻蓝蛋白的细工程体内重组.pdfVIP

摘 要 藻胆体(phycobilisome)是存在于蓝藻和红藻中的一类捕光蛋白复合物，它由藻 胆蛋白（phycobiliprotein ）和连接蛋白组成。藻胆蛋白由藻胆色素（phycobilin ）与 相应的脱辅基蛋白中保守性半胱氨酸的巯基以硫醚键共价结合而成。藻胆蛋白是一 类结构相似的色素蛋白。根据它们的吸收光谱，藻胆蛋白可分为藻蓝蛋白 （phycocyanin ，简称 PC ）、藻红蛋白（phycoerythrin ，简称 PE ）和别藻蓝蛋白 （allophycocyanin，简称APC ），在某些没有藻红蛋白而具有异形胞的蓝藻中，还有 藻红蓝蛋白（phycoerythrocyanin ，简称PEC ）。 裂合酶CpeS 能催化鱼腥藻PCC7120 中β-CPC84、β-PEC84、α-APC82 和β-APC82 位半胱氨酸残基与 PCB 的连接。在血红素氧化酶的作用下，血红素Ⅸ被氧化而共 轭环断裂形成胆绿素 IV ，胆绿素 IV 被藻蓝胆素合成酶还原和异构化形成藻蓝胆素 PCB 。 利用分子生物学方法得到含 apcA 、apcB 、apcC 、cpeS 基因的各种质粒并表达 了相应蛋白。然后将apcA 、apcB 、cpeS、apcC 、ho1(血红素氧化酶基因) 、pcyA （藻 蓝胆素合成酶基因）共同转化大肠杆菌，使其共表达，实现 APC 的体内重组。通 过测定光谱和锌电泳检测体内重组产物。 将cpeS、ho1 、pcyA 和脱辅基藻蓝蛋白突变体基因cpcB(C155I)、脱辅基藻红蓝 蛋白突变体基因 pecB (C155I)共同转化大肠杆菌，获得的重组菌利用内源性的血红 素合成有光谱活性的PCB-CpcB(C155I)和PCB-PecB(C155I) 。 本工作实现多种藻胆蛋白的体内重组。为研究藻胆蛋白的生物合成，提高对藻 胆体的组装过程的认识打下基础。 关键词: 裂合酶CpeS 别藻蓝蛋白 体内重组 藻红蓝蛋白β亚基 藻蓝蛋白β亚基 I Abstract Phycobilisomes serve as the light-harvesting antenna in cyanobacteria and red algae. These supramolecular protein complexes, are primarily composed of phycobiliproteins, a brilliantly colored family of proteins bearing covalently attached, open-chain tetrapyrroles known as phycobilins. In additional, phycobilisomes also contain smaller amounts of linker peptides, which are required for proper assembly and functional organization of phycobilisomes. Phycobilin chromophores are generally bound to apoprotein at conserved positions by cysteinyl thioether linkages to generate phycobiliproteins. Based on their absorption spectral properties, phycobiliproteins have been assigned to four classes: phycocyanin (PC), phycoerythrin (PE), allophycocyanin (APC) and p