低聚木糖单一组的制备分离及其用于双歧杆菌的体外培养.pdfVIP

摘要 本文研究了聚丙烯酰胺凝胶分离低聚木糖的规律；首次建立了大量制备分离低聚木糖 单一组分的凝胶过滤层析系统，获得了可用作分析标准品的木22糖和木三糖；首次采用体 外间歇厌氧培养的方式，对青春双歧杆菌代谢低聚木糖及低聚木糖单一组分的规律和机理 进行了研究。 对低聚木糖组成和结构的分析表明，低聚木糖中阿拉伯糖基含量为14．75％，低聚木 糖中大部分为中性木二糖至木六糖，少量为酸性低聚木糖，此外还含有木聚糖、酶蛋白和 木质素。高效液相色谱和电喷雾电离质谱分析表明，木27．糖和木三糖不含阿拉伯糖基和 4-O-甲基一葡萄糖醛酸基。木五糖和木六糖含有带阿拉伯糖基的同分异构体。 以超纯水为洗脱液，采用聚丙烯酰胺凝胶Bio．Gel P．2分离低聚木糖时，可按分子量 顺序依次得到纯度较高的木二糖至木六糖。分离低聚木糖过程中，分子量是影响分离的主 要因素，木糖至木六糖和聚丙烯酰胺凝胶之间不存在非特异性吸附现象。分离过程中相邻 两峰问的分离度R介于O，60～1．1l之间，选择因子旺均小于1．2。综合分离效率和产率两 ml／h。 种因素，最适的洗脱速度为12 以AKTAFPLC为控制系统，以XK50／60为层析柱，层析介质Bio．GelP一2，柱温48 ml／h，采用示差折光和280 ℃，脱气超纯水洗脱，洗脱速度120 nin紫外线同时检测，可 用于制备分离低聚木糖单一组分。通过二次分离手段制备出纯度分别为97．08和94．19％ 的木二糖和木三糖，可用作分析标准品。 h后，培养液总糖浓度从5．0 以低聚木糖为碳源在体外培养青春双歧杆菌48 g，L降至 3．21 g，L，pH值从7．O降至4．70，培养过程中获得的最大菌体浓度为0．37gm。它增殖青 春双歧杆菌的能力强于木糖，但较葡萄糖差，其中平均聚合度较高的低聚木糖组分增殖能 力较差，平均聚合度小于7的低聚木糖组分增殖能力较强。代谢过程中，不同平均聚合度 的低聚木糖组分所含的阿拉伯糖基侧链均会被青春双歧杆菌分泌的a—L一阿拉伯呋哺糖苷 酶水解释放出阿拉伯糖。各组分在培养过程中都有木糖累积现象。低聚木糖被青春双歧杆 对青春双歧杆菌代谢木二糖的规律进行了研究。研究结果表明，青春双歧杆菌代谢木 二二糖48 h后，培养液总糖浓度从5．O∥L降至2．93 g／L，pn值从7．0降至4．38，培养过程 中获得的最大菌体浓度为O．33 g／L。木二糖增殖青春双歧杆菌的能力和低聚木糖相当，强 于木糖和平均聚合度较高的低聚木糖组分，但较葡萄糖差。代谢过程中无阿拉伯糖产生， 有木糖累积现象。培养至24h时代谢产物以乳酸和乙酸为主，它们的浓度分别为4．38和 2．62 g，L，在24h的培养过程中不产生丁酸。 g／L，丙酸浓度为O．47 对青春双歧杆菌代谢木三糖的规律迸行了研究。研究结果表明，青春双歧杆菌代谢木 三糖48h后，培养液总糖从5．0 g／L降为1．65g／L，pH值从7．0降为4．44，培养过程中获 得的最大菌体浓度为O．47∥L。木三糖对青春双歧杆菌的增殖能力强于木二糖和低聚木 糖，较葡萄糖差。代谢过程中无阿拉伯糖产生，有木糖累积现象。培养至24h时的代谢 产物主要为乳酸，其浓度达到3．98 g，L，乙酸和丙酸的浓度分别为1．64和0．36叽，在24 h的培养过程中不产生丁酸。 对青春双歧杆菌代谢木五糖的规律进行了研究。研究结果表明，青春双歧杆菌代谢木 中获得的最大菌体浓度为O．41∥L。木五糖增殖青春双歧杆菌的能力强于木二糖和低聚木 糖，较木三糖和葡萄糖差。青春双歧杆菌代谢木五糖时会产生木二糖和木三糖。代谢过程 中木五糖同分异构体所含的阿拉伯糖基侧链会被a．L一阿拉伯呋喃糖苷酶水解释放而产生 大量的阿拉伯糖，随后又会