白腐真菌降解酶及活性黑KN-B生物毒性研究——暨对一种担子菌变异株的初步探讨.pdfVIP

摘 要 本文以黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporum)为对象，检测了 该菌对染料活性黑KN-B(RBKN—B)的降解效应，从木质素降解酶活性以及菌丝 细胞超微结构两方面，研究了RBKN-B对黄孢原毛平革菌的生物毒性效应。此外。 本工作还初步探讨了一种白腐真菌诱变株(暂名12#诱变菌)的产酶情况，以及 该菌生物反应器处理对复配染料生物毒性的改变。 本工作得到以下结果： (1)本培养条件下，黄孢原毛平革菌纯培养液中能检测到锰过氧化物酶 (MnP)和较低水平的漆酶(Lac)活力，未能检测到木质素过氧化物酶(LIP) 活力。MnP和Lac活力均在培养5天后检测到，培养7天时MnP活力达到最高。 (2)RB KN-B的最大吸收波长为598nm。经黄孢原毛平革菌处理后，各RB 减小。紫外段的吸收光谱也发生了变化，提示部份RBKN—B被黄孢原毛平革菌 降解。 RB KN—B作用下，黄孢原毛平革菌的MnP活力升高；高于200rag／L (3)50mg／L KN—B浓度增加而增强，较低剂 剂量的RBKN—B抑制MnP活力，抑制效应随着RB 量RB 诱导后抑制的效应。 (4)应用发光细菌急性毒性实验及蚕豆根尖细胞微核分析方法检测RB KN-B染料溶液的生物毒性，结果表明RBKN—B具有一定的急性毒性和致突变性。 RB KN．B能导致部分菌丝细胞质壁分离以及细胞壁增厚。高 (5)50mg／L KN．B则能够破坏细胞膜，损伤线粒体，导致胞质凝结， 于200mg／L剂量的RB KN．B剂量增高而加 胞质内容物减少，’呈现大片电子空白区，损伤程度随着RB 大，表明RBKN．B对黄孢原毛平革菌具有明显的细胞毒性作用。 (6)采用难交实验改变摇瓶培养条件，均未在12#诱变蘸培养液中检测到 木质素降解酶活性；在12#诱变菌生物反应器系统中，加入一定剂量复配染料后， 能够在反应器出水中检测到LiP和MnP活力。表明该菌在共生体系下能够产生木 质素降解酶。 (7)应用发光细菌法和蚕豆根尖细胞微核率实验的方法，检测12#诱变株生 物反应器处理前后复配染料溶液的生物毒性。结果表明，lOOmg／L和400mg／L复 配染料溶液经处理，致突变性明显降低，lOOmg／L复配染料溶液急性毒性明显降 低，但400mg／L复配染料溶液的急性毒性未见明显改变。 上述结果提示：黄孢原毛平革菌能够降解染料RBKN—B，降解过程主要依 KN—B能够影响黄孢原 赖关键酶MnP；作为具有生物毒性的外源性化学因子，RB 毛平革菌MnP活性，损伤菌丝细胞结构。黄孢原毛平革菌对RBKN—B的反应在酶 活水平上表现为类似于机体在不良环境条件下的应激反应，经历了诱导、抑制直 至衰退的过程；RBKN—B对黄孢原毛平革菌菌丝细胞超微结构的损伤效应随RB KN—B剂量升高而增强；RBKN—B所致的菌丝细胞结构损伤与MnP活力降低密切相 关，提示MnP的产生可能是白腐真菌响应外界不良刺激的应激反应之一。12# 诱变菌在拭生条件下能够产生木质素降解酶，该菌生物反应器具有一定的降低复 配染料生物毒性的能力。 关键词： 黄獠原毛平革菌 活性黑KN—B 锰过氧化物酶 超微结构 急性毒性 致突变性 On ofwhiterot Studyligninolyticenzyme system fungi and the ofReactiveBlackK