不同接头的白蛋白干扰素α2b在毕赤酵母中表达量及其生物学活性的研究.pdf

摘要 摘要 目的人血清白蛋白是血浆中含量较高的一种蛋白，在体内能够与许多物质 结合，同时白蛋白也是一些药物的良好载体。在体内可以有效的延长药物的半衰 期，而且也不会对机体产生免疫原性。本实验主要是通过构建不同接头的 SMDll68， 将阳性转化子在合适的条件下，用甲醇诱导表达，取上清进行SDS．PAGE、 达量，最后用细胞病变抑制法(Wish细胞．VSV病毒)测定其抗病毒活性。方法在 白蛋白与干扰素之间通过重叠PCR获得不同的接头的白蛋白干扰素，接头的氨 基酸数分别是15、10、5，在相同的条件下，先对每一种接头的白蛋白干扰素进 行诱导表达，筛选出表达量最高的一个，然后分别取三种表达量最高的克隆在相 同的条件下甲醇诱导表达，分别测定表达量，比较大小。根据表达量的差异，用 500 mL摇瓶培养，初步分离纯化蛋白，最后再用细胞病变抑制法测定其活性大 小，分别计算出比活。结果通过重叠PCR构建的三种接头蛋白的重组子，在毕 mg／L。三种接头的白蛋白干扰素比 达蛋白浓度分别是194mg／L、135mg／L、177 活差异较小，比干扰素0【．2b的比活低了很多，可能是白蛋白的存在影响了干扰 素伍．2b的活性位点。结论我们发现15个氨基酸接头蛋白的白蛋白干扰素表达 量最高，其次是5个氨基酸接头的，在白蛋白与干扰素之间用一个柔性肽进行连 肽为(GGGGS)2，这些研究对工业化生产有一定的理论指导作用。． 关键词人血清白蛋白干扰素a-2b，表达，酶联免疫吸附(ELISA)，抗病毒活 性，毕赤酵母 不同接头的白蛋白干扰素Q．2b在毕赤酵母中表达量及生物活性研究 Abstract with of Humansertlmalbuminisa levels objective proteinhigher plasma, whichCancombinewith substancesinthe isalsoa many body．Albumingooddrug the Can extendthe willnotto carrier．In bodyeffectively drughalf-life，but produce wanttomakedifferentlinkerof immunogenic．Thisexperiment pPIC9一HSA-IFNa一2b， andthenthe wascutwithrestrictiveendonucleasesal pPIC9K-HSA·IFNa一2b I，At thesame lined WastransformedintoPichia．PastorSMDll68 time，theplasmid by transformantsthe induceof electroporation，positiveexpresstargetproteinby methanolunderthe SDS—PAGEand rightconditions，thesupematantanalyzedby