BPD-MA光力学作用对兔血管平滑肌细胞影响的实验研究.pdfVIP

，心、 !型望 !!旦：丛垒圭垫堕至堡塑盟鱼垒鲎±盟垫鱼堕篓堕鱼盎垒翌垂 士盘垫墨 q1文摘要 BPD．MA光动力学作用对兔血管平滑肌细胞影响的 实验研究 专业：生物医学工程 硕士生：邵颖文 指导老师：李晓原副教授 摘要 transluminal 经皮腔内冠状动脉成形术(percutaneouscoronary angioplasty， PTCA)是治疗冠心病的主要方式之一，但术后6个月内30％～60％的病人仍然会 术后再狭窄的主要原因为内膜增生(intimal muscle smooth 理是血管平滑肌细胞(vascular cell，VSMC)凋亡的严重不足、过度 增殖并从动脉中层向内膜移行及合成胞外基质的沉积。VSMC的游移和增生是其 中心环节。因此，寻找一种方法选择性地作用于增生活跃的血管平滑肌细胞并对 之产生细胞毒性作用，促进VSMC凋亡，阻遏其游移和增生是防治内膜增生所致 血管再狭窄的关键。目前已针对IH的发生机制研究了多种药物和对抗措施，有多 种包括基冈、生长因子、放射、激光等不同的预防[fIL管再狭窄的技术和方法，激 光光动力学疗法就是其中的一种新型医疗技术。 therapy，PDT)是在光敏荆参与下，光敏剂选择性 光动力学疗法(photodynamic 优先积聚病变部位，在特定波长的光源照射激发下，产生单态氧和一些活性氧物 质，通过氧化作用诱导靶缔胞的坏死和凋亡。组织选择性和作用强度可定量控制 是PDT方法所具有的两个突出特点，光动力学疗法为临床防治术后血管再狭窄提 (／≯、 竺!! !!旦：塑垒查型堕至堡璺!±垒垒鲎±遏些鱼堕墅鱼鱼盎堕堡垂 土圭垫墨 供新的于段。 光敏剂是光动力学治疗的核心物质，但以往PDT用于预防PTCA的研究主要 采用第一代光敏剂，存在着体内滞留时问长，毒副作用大的问题，近年来第二代 光敏剂的发展克服了第一代光敏剂缺点，采用第一代光敏剂的光动力学疗法用于 PTCA再狭窄的研究越来越引起人们的重视。 脂质体的苯并卟啉衍生物单环酸A(BPD—MA)是新型的第二代光敏剂，其 特点是合成纯度高，光敏活性高，机体清除快，毒副作用低，目前应用于肿瘤和 老年性黄斑病变的PDT治疗。以BPD．MA作为光敏荆的PDT预防血管再狭窄的 研究还很少，而采用波长为650nm半导体激光作为激发BPD．MA的光源，用于 PDT预防血管再狭窄的研究，幽内外尚无研究报道。 本课题拟采用这种新型光敏剂脂质体的苯并卟啉衍生物单环酸A，用波长为 650nm的半导体激光照射，研究不同光敏剂剂量及不同激光照射剂量光动力学作用 对兔胸主动脉平滑肌细胞的影响，通过观察细胞抑制率(MTT法)、原位细胞凋亡检 细胞的增殖影响的机理。 方法： 】．细胞增殖抑制率的检测 体外培养的兔血管平滑肌细胞，以每孔2×105个细胞均匀接神于96孔培养板 内，贴擘24小时，之后无血清的培养液培养24小时使细胞周期同步化。依次加 终浓度为O．25mg／ml，不做激光照射，G组单纯激光组，仅接受相同剂量激光照射， 不加光敏剂BPD—MA，H组空白对照组，未加任何处理。 再培养24小时。 lI ，．一j1、 兰!兰 !!垒：丛垒查堑塑生堡旦堕丝垒鲎±监些塑堕墅鱼堕塞熊堡查 主皇垫皇 用MTl’法榆测各组细胞吸光度，计算各组细胞的抑制率。 2．TUNEL法检测细胞的凋l’． 体外培养的血管平滑肌细胞，以每孔8×105个细胞均匀接种于内置小玻片24 孔培养板，贴壁24小时，之后无m清的培养液培养24小时使细胞周期同步