大豆寡糖对肠道生态与免疫功能的调控作用及机制研究.pdf

摘要 摘要 婴幼儿消化生理功能尚未发育成熟，断奶或食物的改变常引起肠道免疫应激 和功能紊乱，致使消化吸收不良，导致生长发育迟缓。大豆寡糖来源丰富、无有 害残留，且具有明显的益生素作用，但对其调节肠道微生态和免疫功能的作用了 解不多。由于仔猪断奶时期的生理特点与婴幼儿非常接近，本研究以断奶环江香 猪作为试验动物，通过体内、体外试验分析大豆寡糖对肠道微生态及免疫功能的 调节作用，并探讨其机制，为改善婴幼儿的营养供给提供新思路，同时为大豆寡 糖的综合开发利用提供理论依据。 l。大豆寡糖对小肠形态与营养物质代谓|的影响：选用体重为3．19kg左右的 21日龄断奶环江香猪，随机分成2组加以不同处理，每个处理6个重复，单栏饲养， 分别饲喂基础R粮(对照组)和添加大豆寡糖的基础日粮(大豆寡糖组)，自由 采食和饮水，试验期为14d。记录每天的采食量，分别于试验开始和结束时称取 空腹体重并采集血液，肝素抗凝，离心分离血浆，测定生化参数和游离氨基酸的 浓度；采血后，按常规方法进行屠宰，采集小肠组织，测定基因表达、并观察组 d， 织形态；再选用10头环江香猪，随机分为2组，处理同前。预试期4d，正试期3 收集粪样，指示剂法测定粗蛋白和粗脂肪的表观消化率。结果表明，与对照组相 比，大豆寡糖组仔猪生长性能无显著变化(PO．05)；血浆甘油三酯、尿素氮 和血氨浓度显著下降(PO．05)，总蛋白浓度显著升高(P0．05)；血浆甘氨 酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸和蛋氨酸的浓度均显著升高(PO．05)：空肠SGLTl、 GLUT2 小肠绒毛高度与隐窝深度之比显著升高(PO．05)；大豆寡糖组仔猪粗蛋白和 粗脂肪的表观消化率均有提高趋势(P0．05)。 2．大豆寡糖对肠道微生物区系及其代谢产物的影响：收集空肠、回肠、盲 肠和结肠内容物，测定断奶环江香猪肠道微生物区系、肠道内容物中部分细菌数 量变化及其代谢产物的含量。结果表明，大豆寡糖组仔猪回肠和结肠内容物中微 生物的多样性增加，其中双歧杆菌、短双歧杆菌、罗氏菌属和产丁酸菌(梭杆菌 属)等有益菌群的数量及其代谢产物丙酸、丁酸等短链脂肪酸的含量均显著增加 (尸0．05)，大肠杆菌、梭菌属和链球菌等有害细菌的数量及异丁酸、异戊酸 和氨等蛋白质分解代谢产物显著减少(P0．05)。 然后进行体外发酵试验，厌氧收集环江香猪的空肠、圈肠、盲肠和结肠内容 物作为接种物，分别以0(对照组)、0．5％、1．0％、2．0％、5．O％、8．O％大豆寡糖 (大豆寡糖组)、2．O％葡萄糖(葡萄糖组)为底物体外发酵。于接种后0、1、2、 1I 摘要 4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、30、36和48h记录产气量，用产 气动力学方程分析大豆寡糖的发酵特性，并于发酵48 h结束后检测发酵液pH值、 NH3．N和短链脂肪酸的浓度以及微生物区系。结果表明：各添加剂量的大豆寡糖 组最大理论产气量和产气速率均显著高于对照组、显著低于葡萄糖组(P0．05)， 接种回肠内容物的大豆寡糖组产气速率显著低于葡萄糖组，僵在结肠内容物发酵 液中却显著高于葡萄糖组(P0．05)，接种结肠和盲肠内容物的大豆寡糖组和葡 萄糖组的体外发酵延滞产气时间均显著低于对照组(P0，05)：各肠段内容物的 大豆寡糖组发酵液pH值、NH3-N浓度均低于、短链脂肪酸浓度均高于对照组，其 中乙酸浓度随大豆寡糖添加剂量的增加呈减少趋势、丙酸和丁酸浓度呈增加趋 势，2，0％大豆寡糖组结肠发酵液中丁酸浓度最高；随着大豆寡糖添加量的增加， 肠道微生物区系与有益细菌数量先增加再减少，而有害细菌数量呈先减少后增加 的趋势。 3．大豆寡糖对免疫功能与肠道紧密连接的影响：测定血浆中免疫球蛋白和 细胞因子的浓度：采集脾脏、回肠和结肠组织，分析免疫相关基因和肠道紧密连 接基因的rnRNA表达。结果表明：大豆寡糖增加了血浆免疫球蛋白IgG和IL-10的 和IL一8mRNA以及TLR2一NF．rd3mRNA的表达降低，结肠和脾脏中IL．10mRNA