.4的的昆虫病原真菌资料.ppt

（二）简易生产法1、场地选择 选无积水的空地、林地，夏季气温较高时，以遮阴通风的地方为好。然后用疏松的细土（最好是新土，不必消毒）做个长方形的平整床面，高15cm-20cm，以不被水淹为原则。或挖15cm深的长坑，坑底要平，周围垫以3cm左右的土，以防水淹。床宽80cm为宜，以便操作。长度不限，可按投料多少而定。床面四周挖排水沟，以防积水淹没床面。为避免日晒雨淋，在床上应搭一个南高北低的凉棚，棚子南面高1.3m左右，北面高1m左右。如床面太干，可喷些水保持床面土湿润，以免土干吸取培养基的水分，影响白僵菌的生长。2、菌种扩大培养 一级菌种可采用试管装麦麸（麦麸与水的比例为1：0.5-1:0.8）或大米饭灭菌。接种后置25℃-28℃下培养7d-10d，待麦麸中长满白色粉状孢子，即进行二级固体扩大培养。二级生产一般用罐头瓶装湿麦麸（麦麸与水比例为1：0.5-1:0.8）,所装的湿麦麸约为罐头瓶容量的1/3-1/2。高压蒸汽灭菌，待瓶温降至45℃时，用接种针刮入菌种，接种量为每瓶用一支试管菌种，然后摇匀，置25℃-28℃下培养。培养前期3d-4d内为利于菌丝体迅速生长，在瓶口盖纱布棉塞和牛皮纸以保温。培养后期为适应孢子对高温低湿的要求，把牛皮纸盖去掉，并提高培养温度至30℃促使产生大量孢子。严格选择无杂菌的二级固体种子，准备露天培养接种用。 3、露天培养 露天培养包括顺序进行的几个步骤。首先是灭菌和接种。三级露天培养料可选用新鲜麦麸，或加入10%谷壳、锯末、粉碎的玉米秸粉（料水比例为1：0.8），用0.1%-0.2%的高锰酸钾液拌料。经试验，由于微量元素锰的作用，培养24h-26h，白僵菌丝即可布满培养基，不易被污染。但高锰酸钾液浓度低于0.1%则效果不明显。把拌匀的料用布袋疏松包成0.5kg-1kg的小包，轻轻放入高压灭菌锅或常压高温灭菌锅内（在常压高温灭菌锅中100℃须保持两个小时以上）进行灭菌。接种以清晨或夜间最好（空气杂菌少）。先将灭过菌的三级料倒入干净的盆子或铺有塑料薄膜的簸箕中（手、盆、塑料薄膜须事先用2%的来苏尔水洗刷消毒）。摊开降温，待料温降至50℃左右时才接种。因为白僵菌丝的穿透力比较弱，接种时不但要搅拌均匀，而且要把培养基中的料团搓细，以免污染杂菌。接种量可以稍大些，按料与二级种子10：1的比例接种，这样白僵菌生长较好。 第二步即入床，先在床面上铺二层灭过菌的旧报纸，再将接过种的培养基迅速疏松铺平（厚3cm-6cm左右），在料上再盖灭过菌的旧报纸，并根据不同天气加覆盖物。晴天应在灭菌的报纸上盖上1cm-2cm厚的湿润细土或细砂（不用消毒），以控制水分蒸发，阴天多雨时空气湿度大、则只用两层灭过菌的旧报纸覆盖即可。 入床后的管理应根据白僵菌的最适生长条件来进行。根据白僵菌生长温度范围（5℃-30℃）内最适宜发育温度为25℃-28℃，以及培养前期（3d-4d）需低温高湿才便于菌丝体繁殖，后期需低间断高温才便于形成孢子的要求。夏季露天培养时一定要有凉棚，以利遮阴和通风，避免阳光直射，且以散发品温急剧增加的热量。如气温高，则培养前期还要在覆盖物上少喷、勤喷凉水，以保持培养湿度，但也要防止湿度过大使培养基污染杂菌造成霉烂。接种后如遇低温，可覆盖一层塑料膜进行保温保湿，大约5d-7d即可收获。4、露天培养的优点 白僵菌的露天培养具有设备简单、方法简便、不需要大量投资且操作管理简便等优点，适宜于农村推广。此外，杂菌污染少，利于大量生产。培养床在新接种时不必消毒，如重复接种，可在接种前用日光照射半天或更新床面，达到消毒的目的，这样可节省尤其是消毒药剂。因生产范畴不受房间限制，可选择适当场地大量生产。露天培养时，前期湿度易控制、后期品温较均恒，利于菌丝和孢子的生长。 （三）产品质量检测 白僵菌的产品质量检测目前主要是测定菌粉的含水率和含孢子数（或含活孢数），但这两项指标都不能完全反映产品的质量。因为产品的质量还应反映产品的毒力，而目前还没有测定毒力的简更易行的方法以统一标准，所以暂时还是以菌粉含水率和含孢子数作为主要的质量指标。1、含水量的测定用分析天平称取菌粉1g，放在烘箱内用120℃烘2h，再称菌粉重量，算出失水重量百分比。计算公式： b B=——×100% G式中：B=含水量%，b=烘干后减轻的重量，G=烘干前菌粉重量。2、含菌量的计算。（1）平板计数法 在无菌的条件下，取1g白僵菌样品，系列稀释至1×106倍，取1mL作平板培养48h-72h，根据长出的菌落数，即可推算出1g菌剂中含有活孢子数。