pcugna-mi载体的构建及利用gna改良水稻抗虫性.pdfVIP

摘要 l的人口以稻米为主食，而虫告 L)是巫要的粮食作物之，我国有50％DA 水稻(Oryz口sdtiva 严碾影响着水稻高产稳产，实践证明，抗虫品种的应川是最为经济有效的办法。常规育种由丁 受到种质资源稀缺雨1生殖隔离豹限制，至令还未很好地解决职稻的抗虫性。植物转基闪技术晌 山现年¨成熟，为我们解决这个问题提供了一条仃效的途径。但是，转基俐植株中的除草剂或抗 生紊抗一『唪标记基因的环境利食品安全性一直颇7r争议，这限制了转基冈l：作的发展和转基冈植 物的更火面积推广。基于这一点，本研究将来源l：人肠杆菌的6-磷酸甘露耱异构酶(肼r)安 全选择标记基冈干¨雪花莲凝集素(6Ⅲ)抗虫基冈构建丁同一嵌达载体上进行遗传转化，其土要 成果如下： PMT， 1．构建了一个包含抗虫基因GM、安全标记基冈M利报告基蚓G晒的表达载体pCUGNA 2．对10个材料的成熟胚雨I幼胚进行诱导，实验结果表明：1)NB培养基适合幼胚培养，而 cC培养基适合成熟胚培养。2)幼胚低温处理效果夺蛸显，处理对闻最好小超过3天：成熟跹 进行适当的低温处理，其诱导效果可以得到改善。3)不同材料、不同外植体，第一次继代时 间不同，整体上幼胚比成熟胚第一次继代时间甲。4)不同材料、不同外植体uj诱导率小吲， 其中幼胚出愈率比成熟胚高，粳稻Ⅲ愈率比籼稻高。5)不同材料、小I司外植垌『不同第一次继 代时问，愈伤组织的褐化趋势不同。 的转化，质粒pCUGNA—hyg的转化获得了较好的转化效果，每个材料用农杆苗法和摹因枪法转化 PMI的转 部获得了gt|t|生植株，其中，以日本睛、ZH9}【ID香B的转化率较高。而质粒pCUGNA 化效果较差，基因枪法没有得到绿茁，农杆菌法仅得到14株绿苗，其r”8株为Fll性，日本晴有 4株，ZH9有3株，501R有1株。 4．随机选取PCR附眭植株进行Southernblotting实验，结果表明：农；}十菌转化法的外源基 冈主要以单位点形式插入水稻基网组，而基因枪法的外源基冈则主婴是多位点插入。 5．对转基I划植株后代进行的遗传分析表叫，农杆菌转化法获得的叶陛植株，人多数符合孟 德尔的单基睥l遗传规律，为单f口点插入；而基冈枪转化法获得的附降植株，!j!|】主要以多化点的 方式捅入，厉代分离不符合3：1的分离比；结论’，Southern blotting相同。 关键词：遗传转化：载体构建；安全标记基Ⅲ；抗虫基冈；PMI基冈；GNA基冈 ABSTRACT than sativa oneofthemost food accountsformore L．)is importantcrops．It Rice(Oryza of oflbod in isvulnerabletotheattackwide tiffv China，however，it percent consumption andeffectivetocontrol fact thatitiSeconomical ofdestructiveinsects．Theshows range insectswitht