真鲷（Pagrs major）P4501A酶基因的克隆、表达及其对B（a）P的毒性响应.pdfVIP

摘要 CYP450酶系是一个大基因家族，普遍存在于生物体的亚铁血 红素蛋白中，催化多种亲脂外源物和内源化合物等进行氧化性质的 生物转化，在解毒和激活食物链中的卤代、非卤代烃中起着重要作 端氧化酶，在整个酶系功能中起着关键作用。在鱼类方面主要研究 诱导已被作为鱼类暴露于PAHs、PCB、二嗯英以及相关化合物的早 期预警信号及高度敏感的生物反应。在对水生系统污染监测中，诱 导鱼类CYPlAl基因已经被认定为一种灵敏的早期预警的方法。 eDNA 本文根据国外已发表野生真鲷(Pagrusmajor)肝CYP cDNA 性约为93％，氨基酸序列同源性大于90％。 I、Xba 别用BamH I酶切处理，回收纯化后，连接构建重组载体， CYPlA，将其转化到表达宿主菌E．coliTOPl0F’中，用IPTG37。C诱 其大小与预计分子量相当，Western 目的蛋白。 通过Northern blot成功检测了在BaP染毒诱导下真鲷肝、鳃、 间的表达水平。经BaP诱导，真鲷脾中CYPlA表达水平相对较低， 肝和鳃中CYPlA表达水平相对较高。另外在BaP诱导24小时以内， 导变化较为明显，BaP在不同浓度、不同时间条件下，可以诱导鳃 CYPlA mRNA呈现不同的表达变化，预示着通过检测CYPlA mRNA水平可以预测BaP的毒性浓度和作用时间。 本研究为进一步揭示有机污染物的毒性效应机制和进一步探讨 P450酶作为毒性效应的生物标志物奠定基础。 blot ABSTRACT The P450detoxificationisan cytochrome system extensively studied andhasbeenfoundin enzymesystem animals．Itisinvolvedinthemetabolismof suchas compoundssteroids， xenobiotics．Themost prostaglandins，eicosanoids，drugs，andintensively studied P450 infishis P4501A cytochrome cytochromeprotein arguably 1 1A hasbeenidentifiedinmostfish (CYPA)．CYPgene species examined．Itsis inducible genehighly bypolyaromatic dioxins．In and (PAH’s)，polychlorinatedbiphenyls(PCB’s)，furans contaminationin