痕量重金属离子脲酶抑制法快速检测技术研究.pdfVIP

上海交通大学硕士论文 痕量重金属离子的脲酶抑制法快速检测技术研究 摘 要 重金属是环境的主要污染物之一 它不但能影响环境介质的特 性 还能积累和贮存在生物体内 从而影响农产品质量和人畜健康 因此测定生物体 自然水体 土壤 空气和食品中的痕量有毒重金属 显得非常重要 近年来 酶已经被作为一种很有力的工具来测定环境介质 水 土和废弃物 和食品中的痕量有害物质 如乙酰胆碱脂酶已被用于有 机磷农药残留的快速检测 与传统的分析方法相比 酶抑制法具有简 便 快捷 费用较低和减少仪器分析所用的样品数量等优点 脲酶对 重金属离子具有高度敏感性 并且其活性不易受大多数农药和有机化 合物的影响 因此常被用于评价环境样品中重金属的毒性 鉴于脲酶 的这一优点 本论文旨在研究以脲酶抑制法为基础的环境样品中重金 属离子的快速检测技术 主要研究结果如下 1.研究了游离脲酶抑制法检测痕量重金属离子的灵敏度及其 主要影响因子 将游离脲酶与环境样品混合接触一定时间 加入微量 尿素 通过显色反应即可以确定是否有重金属离子存在 实验结果表 明 缓冲液类型 pH值 抑制时间 培养时间以及络合物都能对灵 1 上海交通大学硕士论文 敏度产生明显的影响 合理选择上述诸因子对于实现快速 痕量检测 起着决定性的作用 该法能在25分钟内检测到浓度大于0.001mg/L 2+ 2+ 2+ 2+ 的 Hg和Cu Pb Cd最低检测限分别为0.5mg/L和0.020mg/L 2+ 3+ 2+ Zn Cr Ni等重金属离子也均能在低于1mg/L以下被检测到 并 且可以通过显色反应而不借助仪器来判断环境样品中重金属的存在 与否 此外 酶抑制法还能用于评价环境样品中重金属离子的毒性和 区分主要的污染物 2.以酶标板作为脲酶的载体 分别以戊二醛法和戊二醛 BSA 法来固定脲酶 通过比较两种方法的固定化效果 选择可用于制备检 测重金属离子的脲酶试剂盒 戊二醛浓度是影响固定化效果的决定性 因素 随着戊二醛浓度的减小 固定化酶活性递增 比较发现戊二醛 法的固定化酶活性更高 当戊二醛浓度为 0.05%V/V 时 活性最 大 其吸光度为0.760米氏常数Km50.38mM 2+ 2+ 3.固定化脲酶能检测10g/L以上的Hg和Cu 对各种重金属 2+ 2+ 离子的IC值比游离脲酶检测所获值高出2个数量级 其对HgCu 50 2+ 2+ CdNi的IC分别为0.41mg/L0.25mg/L2.89mg/L13.50mg/L 50 固定化过程降低了重金属离子对脲酶的抑制效应 使检测灵敏度下 降 尽管如此 固定化酶具有更方便 易于存放 酶活性不易损失等 特点 而且能消除环境样品中本身具有的氨的干扰 可用于检测受重 金属污染较严重的环境样品 关键词 脲酶 重金属 灵敏度 抑制率 固定化 检测限 2 上海交通大学硕士论文 STUDY ON FAST DETERMINATION OF TRACE HEAVY METAL BY UREASE INHIBITION ABSTRACT The determination of trace toxic heavy metals in biological material, natural waters , soil and air has become very important because the environments is for this class of pollutants especia