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生化分离工程 第二章 生化分离技术 破碎缓冲液 一般为0.1-0.2mol/L，pH为7－8的磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液（与细胞内环境相似） 4.1 细胞破碎技术 细胞破碎的目的：使细胞壁和细胞膜受到不同程度的破坏（增大通透性）或破碎，释放其中的目标产物 1、机械方法破碎 1）珠磨法（bead milling） ：细胞悬浮液与极小的研磨剂如玻璃小珠、石英砂等一起高速搅拌，细胞与研磨剂之间相互碰撞、剪切，使细胞达到某种程度破碎，释放内含物 2）高压匀浆法（ high-pressure homogenization ） 破碎原理：利用高压使悬浮液通过针形阀，从阀座与阀之间的环隙高速喷出后撞击到碰撞环上，细胞在受到高速撞击后，急剧释放到低压环境 破碎作用力：突然减压和高速冲撞 3）超声波破碎（ultrasonication） 机械破碎法总结 以上几种机械破碎法的作用机理不尽相同，有各自的适用范围（包括菌体细胞、细胞发酵液的特性）和处理规模（实验室或工业用） 2、细胞物理破碎方法 1）渗透压冲击法（osmotic shock） 最为温和的一类细胞破碎方法，适用于易于破碎的细胞，eg.动物细胞和革兰氏阴性菌。 细胞于高渗介质中？脱水达到平衡后，迅速将其转置于低渗透压的水或缓冲液中，水进入细胞使胞壁和胞膜破裂 3、化学法破碎 用某些化学试剂溶解细胞壁或抽提细胞中某些组分 酸碱、某些表面活性