生化技术补充酶催化活性的测定方法创新.pptVIP

* * * * 补 充 2　 酶催化活性的测定方法 目 的 掌握定时法和连续监测法测定酶活性的原理及方法 一、测定酶促反应速度的两类方法 （一）酶促反应速度的表示方法 单位时间的底物的消耗量（-d[S]/min） 单位时间的产物的生成量（d[P]/min）来表示 （二）测定方法分类 定时法 在一定时间内通过测定总变化量再计算出速度. 连续监测法 直接用来测定速度 （一）定时法 1.概念 在足量的底物系统中，加入一定量的酶试剂，反应一定时间后，加入终止剂终止反应，然后测定底物的消耗量或产物的生成量 2.酶活性的结果计算 假设某一样品的酶活性为X（U/L），取样品量Vs毫升与底物缓冲液Vr毫升孵育，经过t分钟反应，加入终止液 Ve(ml)，检测到产物净吸光度增加为A，该产物的摩尔消光系数为 ε（终点法的摩尔消光系数一般可通过带标准求得）比色皿光径为b(cm) 若把A/t以ΔA/min表示，则此定时法测定酶活性的计算公式与连续监测法相同 3.定时法与终点法和两点法的区别 定时法 是经过一定时间（固定的时间）反应后终止反应 终点法 指反应基本达到平衡，信号变化很小，但可以不需要终止反应 两点法 监测反应过程中的两个点，即某一段时间内的底物或产物的变化 （二）连续监测法 1.原理 连续监测法是将酶与底物在特定条件（缓冲液、温度等）