靶向抑制miRNA-21对K562细胞增殖及其PTEN-P13K%2fAKT通路的影响.pdfVIP

IHllIIlUlllllllllll Jllllllllll 目 录 中文摘要………………………………………………………………………．1 英文摘要………………………………………………………………………．4 英文缩写………………………………………………………………………．7 路的影响 前言……………………………………………………………………………………………．．8 日U吾……………………………………………………………………………………………“ 材料与方法………………………………………………………………．8 附图………………………………………………………………………18 附表………………………………………………………………………．．24 讨论………………………………………………………………………25 结论……………………………………………………………………………………………．．25 参考文献………………………………………………………………．．29 综述……………………………………………………………………………………………………．33 致谢……………………………………………………………………………45 个人简历………………………………………………………………………46 万方数据 中文摘要 靶向抑制miRNA．21对K562细胞增殖及 PTEN-P13K／AKT通路的影响 摘 要 目的：MiRNA是近年来发现的长约19．25个核苷酸的非编码dRNA， 表达具有明显的组织特异性，且与肿瘤的发生发展密切相关。研究发现 miRNA可以调控造血细胞生成，并改变细胞增殖、分化及凋亡。MiRNA．21 是miRNA家族中的重要成员之一，通过调控靶基因及下游信号通路，调 控肿瘤发生。己知抑癌基因10号染色体上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源 P13K／AKT通路活性，从而抑制血管新生并降低肿瘤细胞的增殖及侵袭。 在白血病的发生发展中，PTEN．P13K／AKT通路起到了重要作用。 白血病是一种起源于骨髓多能干细胞的恶性克隆增生性疾病。其主 要表现为细胞恶性增殖、分化障碍、凋亡受阻等，使肿瘤细胞在骨髓及 其他造血系统堆积，并可以浸润其他组织及器官，影响正常造血功能。 随着近年来对白血病发病机制的不断研究，越来越多的肿瘤信号通路被 发现，其中以P13K／AKT介导的信号通路成为白血病发病及治疗的研究热 点。 流式细胞仪技术分析miRNA．21下调后对K562细胞增殖及早期凋亡的影 通过Westernblot检测miRNA．21与PTEN蛋白表达的相关性。 方法：体外培养K562细胞，将细胞分为4组，分别为：空白组、转染 组、随机序列对照组、荧光素对照组。通过电转染，将化学合成的 miRNA．21 察细胞形态，检测细胞转染率，MTT及流式细胞仪检测细胞增殖及凋亡 结果： 1 1 RT-PCR方法检测mi瑚呵A一2inhibitor在K562细胞系中的转染效率 RT-PCR结果显示，miRNA．21 万方数据 中文摘要 转染组、随机序列对照组及荧光素对照组相对空白组表达比例分别为 (8．070士5．138)％、 miRNA．21表达较其他三组明显降低，差异有统计学意义(尸0．05)。 2MiRNA．21 相对于空白组细胞，不同时间段转染组细胞增殖抑制率分别为(2．6士0．4) ％、(4．3士0．6)％、(3士0．5)％，荧光素对照组细胞增殖抑制率分别为