棉籽抗氧化多肽ace抑制多肽的研究.pdf

摘要 lUlI I I II IIIII III II III Y1 摘要 棉籽蛋白氨基酸组成齐全，比例合理，营养价值接近豆类蛋白质，是一种十 分重要的植物蛋白质资源。但目前对棉籽蛋白的食用功能及棉籽蛋白活性肽的生 物活性方面的深入研究尚未见到较详细的报导。本课题以脱酚无毒棉籽饼粕为原 料，提取棉籽蛋白，加入生物酶进行酶解，对水解物的抗氧化能力和血管紧张素 转换酶(ACE)抑制活性进行分析，利用超滤、凝胶色谱、反相高效液相色谱、 等方法进行产物分离纯化，并用质谱对得到的活性肽进行了结构鉴定。本论文系 统研究了酶解工艺的各主要参数、产物的抗氧化活性和ACE抑制活性、抗氧化 肽和ACE抑制肽的分离纯化和结构表征，为开发功能性产品提供理论依据和技 术支撑。主要结果如下： 1．利用碱法提取棉籽蛋白，正交法优化提取条件。采用SDS．PAGE测定棉 籽蛋白的亚基成分，结果显示减法提取的蛋白组成较简单。氨基酸分析结果显示 棉籽蛋白氨基酸组成独特，平衡良好。同时棉籽蛋白具有较好的保水性和吸油性， 以及良好的乳化性和乳化稳定性，适合应用于食品中。 味蛋白酶、Neutrase中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶对其进行水 解，测定了各酶解物的水解度和抗氧化能力。结果表明Neutrase中性蛋白酶水解 物的抗氧化能力最强。在Neutrase中性蛋白酶水解棉籽蛋白单因素试验的基础 上，采用响应面设计进行了试验优化，得到最优的酶解条件为：温度39．5℃、水 解pH为7．5、水解时间5．5h，在此水解条件下，水解度可达到38．09％。 G．25凝胶色谱将棉籽蛋白Neutrase中性蛋白酶水解物 3．利用Sephadex 为指标筛选出具有较强抗氧化活性的组分Fra．111．5，经RP．HPLC鉴定为单一峰； (His—Asp—Asp-Ala-Pro—Arg—Phe)。 4．对棉籽蛋白的六种蛋白酶水解产物的ACE抑制能力进行了比较，结果表 明木瓜蛋白酶水解产物的ACE抑制能力最高(85．61％)。在单因素试验的基础上， 经响应面分析优化，得到最佳酶解条件为：水解温度为43．5℃，E／S为1．04％， pH值为7．5，该条件下制备的棉籽蛋白酶解物的水解度达到25．69％，ACE抑制 率达到88．15％。利用超滤技术将木瓜蛋白酶水解物分离为四个组分，分别为： 摘要 G一25凝胶色谱将超滤组分中的UF—IV分成四个组分Fra．I～Iv，发现 Sephadex Gly—Met·Lys)。 5．在传统方法的基础上，结合纸层析的方法改进食物源ACE抑制肽体外活 性的检测方法，建立了一种在可见光区显色的马尿酸显色方法。首先确定了显色 反应的最大吸收波长为459nm。并在459nm处，对反应条件进行优化，最后确 定最佳的显色温度为40℃，最佳显色时间为30min，最佳的显色剂比例是0．5％。 用卡托普利和棉籽ACE抑制肽作为样品进行检测验证，表明该方法能得到可信 的结果，比传统方法具有更好的重复性、精确性，适合于ACE抑制肽的体外活 性测定。 关键词：棉籽蛋白；棉籽蛋白酶解物；肽；抗氧化；ACE抑制能力 II ABSTRACT ABSTRACT not the fiber intheworldbutalso Cottonis most oneofthe only importantcrop for best sources after is potential plantproteinssoybean．Cottonseedproteingeneral