儿茶素对农杆菌导的茶树遗传转化的影响.pdfVIP

万方数据 摘要 本研究证明茶树难以被农杆菌转化与茶树的一些特定的化合物有关。茶树含有丰 富的次生代谢物质。由于其含有不同种类的、丰富的黄酮类化合物，常被用来研究植 物类黄酮代谢。茶树这些有益特点的遗传改良和生物研究需要一个简单有效而且低成 本的方法。农杆菌介导的遗传转化已经被作为一种常规的实验室方法来进行植物的遗 传工程和生物研究。然而，茶树难以被农杆菌转化，相关机理知之甚少。尽管一些报 道已经得到转基因茶树和毛发根，但目前还没有建立一套高效的茶树转基因体系。先 前的研究已经表明，茶多酚有明显的抑菌活性，所以茶多酚可能会影响农杆菌的生理 活性和植物转化的效率。本研究中，LB液体培养基提取的茶树叶片及愈伤组织内含 物被用来检测对农杆菌及其转化烟草的影响。高效液相色谱法（HPLC ）检测了茶树 叶片及愈伤组织提取液中的主要次生代谢物质，并将这些物质的标准品按照检测的含 量加入到培养基中检测对农杆菌的影响。与生长在LB培养基中的对照组相比，农杆 菌在含有茶树叶片次生代谢物质（6.5 mg/ml儿茶素）的培养基中生长受到抑制，六 个致病基因表达也受到了不同程度抑制（36%-73% ），而且被侵染的烟草外植体出现 褐化，没有外源基因的瞬时和稳定表达。茶愈伤组织提取液含有0.22 mg/mL儿茶素， 对农杆菌生长和烟草转基因毛发根的产生没有显著影响，然而大部分致病基因表达增 强。LB培养基中添加儿茶素混合物标准品，对农杆菌生长、致病基因表达和烟草的 转化有明显抑制作用，而LB培养基添加咖啡碱对农杆菌没有明显影响。上述结果表 明儿茶素是茶叶中影响农杆菌的主要次生代谢物质。利用根癌农杆菌GV3101转化茶 树叶片及愈伤组织，得到很少的的瞬时表达外植体，转化效率很低。而发根农杆菌 15834转化茶树不同部位外植体都得到了转基因毛发根，不同部位转化效率从15%到 20%不等，最高的是下胚轴和子叶，其次是叶片和茎段。我们的研究表明，使用合适 的农杆菌可以克服儿茶素对茶树转基因的影响。 关键词：茶树，茶提取液，儿茶素，致病基因，农杆菌，转化效率 I 万方数据 Abstract In this study, recalcitrance of tea plant (Camellia sinensis) to Agrobacterium-mediated gene transformation was investigated with an emphasis on tea specialized compounds. Tea plant contains abundant secondary metabolic products. The tea plant is often used for studies of plant flavonoid metabolism due to its abundant and diverse flavonoid compounds. Genetic enhancement of beneficial traits and biological studies of tea require a simple and cost-effective approach. Agrobacterium -mediated genetic transformation has been used as a routine lab method for genetic engineering and biological r