农杆菌介导花生传转化条件的研究.pdf

青岛农簸大学硕+学使论文 摘要 农杆菌介导花生遗传转化条件的研究 摘要 藏文搿rachishypogaeaL。)是爨要的潘释作物争经济作耱，但由于花蠡遗传基础凝 窄，抗逆性差，易感多种病虫害，尤其是褐斑病、黑斑病、网斑病等真菌性病害，严鼙 影响其产量和质量。本研究以广谮抗真菌性的8。l，3．葡聚糖酶基因为目的熔因进行了花 生遗传转仡。首先以花童动咔为，}植傣透行培莽，建立了花童动哼高额再囊体系；蒸嚣 以此体系为培养基础对农杆菌介导的花生遗传转化影响因素进行了研究，并将B．1，3．葡 聚糖酶基因转入花生，获得了转基因植株，结恭如下： l。篾花生品秘裁寅22务蕊弯23棼磅翳，麓转手羲发5．7d弱璐咔奶凌垮养在添加 NAA+6．0 NAA和BAP的MSB5培养基上谤导不定芽的形成，结果表明MSB5+l mg／L 务90％。赘影或不定芽酶愈接毁织转移到添加BAP粒MSB5珞养基上促使蒡诤长透一 步长成小苗，结果教明MSB5+4．0BAP的培养基最为宥效，花育22和花育23棱 mg／L 株诱导率分别达到89．6％和91．8％。将再生小槭株从基部切下转至生根培养基上，使其 生撂长成完整植稼。农MSB5+0．5 mg／LNAA培赛基土生根效聚较好。 2。牟唾用花育22和花育23幼叶为受傣靖释，对农扦菌介导的花生遗传转纯条件进 聚糖酶基因争Km抗性基因。确立的转化务件为：Km筛选履为50翔gm，预培养时间 d． 秀2d，簿凌侵染浓度OD6旷O．5，夕}整舔经繁辩阖为10．15min，共瑶秦懿瘸为3 3．将Km抗性再生植株经PCR检测扩增出了与目的基因片段大小栩同的条带，证 明获得了B．1，3．葡聚糖酶基因的_；宅生转化植株。 L．)；纽毁谤棼；逮传转纯：捧癌表姆蕊；13-1,3-蓠聚 美缝蠲：花生(童h)pogaea 糖酶基嗣(BG2) 青岛农谴l夫学硕士学巯论文 Ab盘tact Abstract an oilandeconomic and arelimited Peanut州rachisL．)is hypogaeaimportant crop．Imyieldquality to totheir diseases。Thisisfirstestablisha ofefficient poorresistance，especiallyfungi study system plant intissuecultureof regeneration against regeneration peanut．Base朝thesystem，8-1，3-glucanasegene into method． diseasesWasinnoduced medimedtransformation fungi peanutbyAgrobacteriumtumefaciens