利用中药渣培养芝菌及生物活性成分的研究.pdf

X哆5s㈡ 利用中药渣培养灵芝菌及生物活性成分的研究 摘要 中药渣常被视为废物抛弃，自身的资源未被充分利用，提取药用成分后的 中药渣尚保留许多有效成分，如大量的粗纤维、粗脂肪、淀粉、粗蛋白及微 量元素等，是培养药用真菌的优良原料，国内对利用中药渣培养药用真菌的 报道很少，且缺乏对其有效成分的研究。本课题选择具有代表性的灵芝菌为 试验菌株，提出了“利用中药渣双向发酵培养灵芝菌及生物活性成分的研究”。 本文在中药渣原料资源和利用现状调查的基础上，选择咸阳步长制药有 限公司的中成药“香菊”的药渣为主要原料，进行灵芝菌固体发酵的研究， 以中药渣、棉籽壳代料栽培灵芝子实体作对熙，确定出固体发酵和灵芝子实 体栽培的适宜条件，并对发酵产物(灵芝菌质)和栽培产物(灵芝子实体) 中的主要生物活性成分进行了分析检测，采取水提醇沉法提取菌质多糖，苯 酚．硫酸法测定固体菌质和灵芝子实体中的多糖含量，研究灵芝酸三萜的提取 分离方法，探讨了提取灵芝酸的特性(紫外吸收、显色、红外光谱、抗菌特 性、薄层层析)、确定了灵芝酸含量的测定方法，利用HPLC方法测定了固体 菌质和灵芝子实体中氨基酸的组成，原子吸收法测定固体菌质、灵芝予实体、 菌质水提多糖中As、Pb、Hg的含量。获得以下结论： 1．以中药渣为基质进行灵芝菌固体发酵的适宜条件为：温度26～28℃，培养 5．0～6．0，氧气量充足，无需光照，韩芝、赤芝、甜芝 基含水量55—60％。pH 终止发酵时间依次为：41d、38d、36d。中药渣、棉籽壳代料栽培灵芝子实体 4．0～6．0， 的适宜条件为：温度25～30。C，空气相对湿度控制在90％左右，pH 通风保证氧气量充足，CO，浓度不可超过0．1％，需要光照(散射光)。 2．在单因子试验的基础上，通过j_}!交试验确定水提醇沉法提取灵芝菌质多糖 的最佳工艺条件为：料水比1：60、提取温度90℃、提取时间2h、提取次数2 次。苯酚一硫酸法测定发酵终点时灵芝同体菌质多糖含量分别为：韩芝3．35％、 赤芝3．11％、甜芝4．03％，中药渣代料栽培灵芝子实体的多糖含量分别为：韩 芝1．34％、赤芝1．58％、甜芝1．49％，棉籽壳代料栽培灵芝子实体的多糖含量 子实体多糖含量2倍以上。 3．紫外吸收法与可见分光光度法测定灵芝酸三萜的结果表明，紫外吸收法较 为准确可靠，且适合于成分较为复杂的固体菌质中灵芝酸三萜的含量测定， 采用该法测定灵芝酸含量，中药渣栽培的甜芝子实体为1．13％，棉籽壳栽培的 甜芝子实体为0．92％，甜芝菌质为0．54％，甜芝子实体中灵芝酸含量约为甜芝 菌质2倍左右，但子实体栽培时间长，生物效率低，比较而言，从菌质提取 灵芝酸更有价值。选用氯仿：甲醇：水(30：4：1)为展开剂进行灵芝酸TLC 定性分析，结果表明甜芝子实体中有6种灵芝酸呈现出来，而甜芝菌质巾只 有3种灵芝酸较为明显。从灵芝菌质中提取的灵芝酸粗品的红外光谱(IR) 与齐墩果酸的红外光谱(IR)比较表明，灵芝酸的红外光谱与三萜化合物的 特征吸收峰相一‘致。 4．氨基酸分析结果表明，甜芝子实体和甜芝固体菌质至少都含有17种氨基酸， 其巾包括7种必需氨基酸，除半胱氨酸外，固体菌质中其余氨基酸含量均高 出甜芝子实体中对应氨基酸含量的2倍以上，氨基酸总量为甜芝子实体的 2．675倍，必需氨基酸总量为甜芝子实体的2．679倍。必需氨基酸和总氨基酸 FAO／wH0提出的氨基酸模式(／10％)。 11 5．熏金属含量分析表明As、Pb、Hg含景分别为0．44g／g、1．16 IJ-g／g、0．008 u u u g／g(甜芝子实体)，0．26g／g、未检出、0．024 g／g(固体菌质)，0．82 ug／g、未检出、未检出(菌质水提