微生物检验第九章分枝放线菌创新.pptVIP

2、结核分枝杆菌抗原检测 3、结核分支杆菌抗体检测 4、全血干扰素释放试验 ESAT、CFP-10 * 分枝杆菌放线菌诺卡菌 Mycobacterium是一类细长略带弯曲的杆菌，含有分枝菌酸，有分枝生长的趋势而得名。具有抗酸性，故又称抗酸杆菌(acid-fast bacillus)。 人结核分枝杆菌 牛分枝杆菌 非洲分枝杆菌 第一节 结核分枝杆菌 荚膜： CR3结合、降解大分子物质、保护、 抑制溶酶体融合 脂质： 索状因子、磷脂、硫酸脑苷脂、蜡质D 蛋白质: 超敏反应、结核结节的形成 传播途径：呼吸道、消化道、损伤的皮肤 疾病：多种脏器的结核病，肺结核最为多见。 免疫性： 高感染率，低发病率。 抗体无保护作用 带菌免疫 细胞免疫 细长略带弯曲的杆菌，抗酸染色后结核分枝杆菌呈红色，背景呈蓝色。菌体外有荚膜。 专性需氧 改良罗氏培养基 生长缓慢 表面干燥、不透明的菜花样粗糙型菌落 液体培养时生成菌膜 抵抗力较强。耐干燥，在干燥的痰内生存6～8个月，对化学消毒剂的抵抗力较强，在3％HCl或6％H2SO4中不被杀死，对湿热敏感,在70％～75％乙醇中数分钟即被杀死。 结核分枝杆菌不发酵糖类，有毒株中性红试验均阳性，无毒株则为阴性，并失去索状生长现象。 H2O2 烟酸 硝酸盐 人型结核分枝杆菌 + + + 牛型结核分枝杆菌 +　 - - （1）Direct Smear 2.Morphologic Examinations 　 报告标准 - 全视野未找到抗酸菌 1+ 100个视野发现3～9个 2+ 100个视野发现10～99个 3+ 每个视野发现1～9个 4+ 每个视野发现10个以上 （2）浓缩集菌涂片检查法 如果直接涂片镜检不易检出结核杆菌，应采用浓缩集菌涂片检查法，以提高结核杆菌的检出率。将标本离心，取沉淀涂片，或采用漂浮集菌法，集菌后标本经反复多次使涂层加厚，一般取3~4个接种环，干燥固定后染色镜检。 3.核酸检测 用PCR法快速诊断结核分枝杆菌感染,特异性与敏感性均大于95％。 ４.抗原检测：用ELISA法检测结核分枝杆菌抗原，可快速得知是否感染结核分枝杆菌． ５.抗PPDIgG的检测 用ELISA法检测患者血清中抗PPDIgG，可作为活动性结核分枝杆菌感染的快速诊断方法，阳性率为80％～90％。 ６.分离培养 专性需氧、罗氏培养基、8w 　 前处理 目的：去除杂菌，痰液均质化。 方法：挑取5ml痰液至已经标记的50ml离心试管中；加入等量的2% N-乙酰半胱氨酸-氢氧化钠（NACL-NaOH）前处理液（去污染）；漩涡振荡20秒；静置15分钟，切勿超过20分钟；加入无菌PBS（PH6.8）至约50mL，盖紧盖子；离心3000r/min，15分钟；倒掉上清液；添加1-3mlPBS（PH6.8）以中和PH至6.8. 无菌毛细管吸取消化后标本0.1ml，滴加于中性罗氏培养基，将接种过的斜面来回晃动，使菌液均匀铺于斜面上，斜面朝上放37℃恒温箱内培养。每一标本同时接种2支。 接种后第一周每天观察一次，此后每周观察一次。阳性结果经涂片证实随时报告。若7天内报告阳性，则为快速生长菌，超过7日则为缓慢生长菌。阴性结果至8周报告。必要时可延长。 ７.鉴定 (1)PCR反向膜探针杂交E LISA法(PCR杂交梳) (2)DNA探针 (3)16s rRNA基因序列测定 (4)高效液相色谱(HPLC)检测 ８.药物敏感性试验 将纯培养物菌悬液，接种含各种浓度药物的固体培养基上，同时做不含药物的对照组。经过培养，含有药物的培养基上菌落数目是对照组的75％以上，则认为该菌对该药物浓度为完全耐药，如无菌落生长则为敏感。 四、免疫学诊断 1、结核菌素试验 原理：纯蛋白衍生物(PPD)，是用三氯醋酸沉淀结核菌培养滤液后的纯化物。 注入皮内后如受试者已感染 结核，则结核菌素与致敏淋 巴细胞特异性结合，形成迟 发型超敏反应性炎症。 应用： ①选择BCG接种对象及测定接种效果，结核菌素反应阴性者应接种BCG； ②结核菌素试验对婴幼儿可做诊断结核病之用； ③在末接种BCG的人群中作结核分枝杆菌感染的流行病学调查； ④可借用其测定肿瘤病人的细胞免疫功能。 第二节 非典型分枝杆菌 指结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌。因具有抗酸性，故又称非典型抗酸性菌。 广泛分布于外环境和人及动物的机体中。已发现50种以上能引起人类疾病，引起的肺部感染。 特点 1、对人类的致病性比MTB低。 2、机体免疫力低下时