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第二章 微生物菌种选育 第一节 菌种来源 工业发酵常见微生物种类 发酵工业上常见的微生物有细菌、酵母、霉菌和放线菌。 细菌 醋酸杆菌（Acetobacter） ，用于生产醋酸和维生素C。 假单胞菌(Pseudomonas)，荧光假单胞菌发酵生产2-酮基D-葡萄糖酸。 乳酸菌（Lactobacillus） ，发酵生产乳酸。 大肠杆菌（E. coli），生产谷氨酸脱羧酶、天冬酰胺酶、天冬氨酸、苏氨酸和缬氨酸。 枯草芽孢杆菌生产淀粉酶、蛋白酶和某些氨基酸、肌苷、5’-肌苷酶等。 梭状芽孢杆菌生产丙酮-丁醇。 北京棒杆菌生产谷氨酸。 酵母菌 酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）：发面和酿酒及分子生物学用。 假丝酵母属（Candida）：生产SCP。 汉逊氏酵母属：产乙酸乙酯。 毕赤酵母属（Pichia）：工业污染菌。 霉菌 曲霉属（Aspergillus）：黑曲霉（A. niger）生产柠檬酸、草酸、葡萄糖酸、糖化酶、酸性蛋白酶、果胶酶、单宁酶等；米曲霉（A. oryzae）用于酿酒和L-乳酸生产。 青霉属（Penicillum），生产青霉素，桔青霉（P. citrinum）可产生5’－磷酸二酯酶，降解核糖核酸为四个单核苷酸。 根霉属（Rhizopus ）用于米酒和黄酒生产， 还用于淀粉糖化菌、有机酸发酵及甾体转化。 毛霉（Mucor）产生蛋白酶，生产腐乳、酱 油，进行甾体转化。 放线菌 最大的经济价值在于产生多种抗生素 链霉菌（Streptomyces） 工业微生物来源 想菌种保藏机构索取有关的菌株，从中筛选所需菌株。 从自然界采集分离。 从一些发酵制品中分离目的菌株。 微生物菌种的选择性分离 工业化菌种的要求 能够利用廉价的原料，简单的培养基，大量高效地合成产物； 有关合成产物的途径尽可能地简单，或者说菌种改造的可操作性要强； 遗传性能要相对稳定； 不易感染它种微生物或噬菌体； 产生菌及其产物的毒性必须考虑（在分类学上最好与致病 菌无关）； 生产特性要符合工艺要求。 杂交育种 杂交育种一般是指人为利用真核微生物的有性生殖或准性生殖，或原核微生物的接合、F因子转导、转导和转化等过程，促使两个具有不同遗传性状的菌株发生基因重组，以获得性能优良的生产菌株。 具体步骤： 直接亲本及其遗传标记选择 双亲本原生质体制备与再生 亲本原生质体诱导融合 融合重组体（融合子）分离 遗传特性分析与测定 在许可温度的基本培养基上生长，而非许可温度的基本培养基和完全培养基上都不生长； 根据菌落生长情况，可分两大类： 1）非必需基因突变形成的温度敏感突变株 在许可温度下的基本培养基上生长，非许可温度的基本培养基上不生长而在完全培养基上生长。是一类突变引起失去单一酶但可以补偿功能的TS突变株。 2）必需基因突变引起TS突变株 在许可与非许可温度下基本培养基和完全培养基上全部生长，则为野生型菌株。 《发酵工程》 第二章 微生物菌种选育 4、抗反馈调节突变株的筛选 反馈抑制 反馈阻遏 →酶的活性 →酶的合成 调节基因或操纵基因发生突变， 使产生的阻遏蛋白不再能和终产物结合或结合后不能作用于已突变的操纵基因 结构基因突变，使变构酶不再具有结合终产物的能力，但仍具有催化活性 解除反馈阻遏 解除反馈抑制 《发酵工程》 第二章 微生物菌种选育 通常抗反馈抑制和抗反馈阻遏突变株是通过 抗结构类似物突变的方法筛选出来的 ◆ 结构类似物与末端产物结构相似，能与阻遏蛋白或变构酶结合，阻止产物的合成，引起反馈调节作用； 但不能代替末端产物参与生物合成 ◆ 抗结构类似物突变株即使在结构类似物存在下，仍可合成末端产物 《发酵工程》 第二章 微生物菌种选育 末端产物 结构类似物 可过量生产的产物 对氨基苯甲酸 磺胺 对氨基苯甲酸 精氨酸 D-豆氨酸，D-精氨酸 精氨酸 色氨酸 5-甲基色氨酸 色氨酸 葡萄糖 2-脱氧葡萄糖 ?-葡萄糖苷酶 《发酵工程》 第二章 微生物菌种选育 5、组成型突变株的筛选 组成酶 酶 诱导酶 ◆ 调节基因或操纵基因发生突变，都有可能获得组成型突变株 ◆ 筛选原则 设计某种有利于组成