白菜类作物硫甙成基因的鉴定及控制硫甙的qtl定位与分析.pdfVIP

摘 要 白菜类作物(Brassicarapa)是我国重要的蔬菜和油用作物，品种类型丰富多样，营 养价值高。伴随着生活水平的逐步提高，人们对白菜类作物的品质性状愈加重视。硫代葡 萄糖甙(硫甙)作为白菜类作物的重要的次生代谢物质，其某些降解产物具有植物防御和 抗癌作用等生物活性而备受关注。拟南芥中硫甙的相关研究已相当深入，而对白菜中硫甙 的生物合成及遗传规律的了解还相当匮乏。白菜基因组测序的完成，使从分子水平上深入 理解白菜中硫甙的生物合成途径、控制白菜中硫甙含量积累的QTL及候选基因成为可能。 本研究对白菜类作物叶片中硫甙的结构及含量进行分析，为进行白菜中硫甙的自然变异 和遗传研究提供基础信息；在白菜基因组测序基础上，利用比较基因组学鉴定了白菜中硫甙 生物合成基因并初步建立起白菜中硫甙生物合成途径；选择硫甙含量存在差异的四个亲本创 建了三个永久性群体，分别构建了遗传图谱，并进一步进行了控制白菜中硫甙积累的QTL 定位分析；对25份重测序材料中硫甙生物合成基因的多样性进行了分析，并针对重测序材料 中硫甙结构和含量的特点进一步分析了影响硫甙积累的可能基因。本研究获得如下主要结 论： 1．利用HPLC法在包括12个类型的215份白菜类作物中共检测到8种硫甙，其中最 主要的硫甙为脂肪族硫甙中的NAP，占总硫甙的40％左右。叶用白菜类作物和芜菁的硫甙 结构和含量存在明显的不同。同种脂肪族硫甙在不同季节间存在极显著正相关；脂肪族硫甙 在不同材料间存在极显著差异，但在不同季节间差异不显著。4,tl菜和芜菁中不同材料间吲 哚族硫甙在季节间存在显著差异，而大白菜中则差异不显著。 2．为了阐明白菜中硫甙生物合成途径，利用比较基因组学在白菜中共鉴定了102硫甙 生物合成基因，其中101个基因被精确的定位在白菜的10条染色体上。这样在白菜中初步 建立起来硫甙生物合成途径。白菜中硫甙生物合成基因存在多拷贝现象，白菜与拟南芥中硫 甙生物合成直系同源基因存在59％一9I％的一致性。并且白菜中93％的硫甙生物合成基因 与拟南芥直系同源基因保持高度的共线性；白菜中硫甙生物合成基因揭示了白菜基因组的进 化，同时白菜中硫甙生物合成基因能解释白菜中硫甙的特征。 3．针对BILs群体，构建了一张包含lO+连锁群的整合图谱，该图谱包括618个标记(SSR、 群体均分别构建了遗传图谱，遗传图谱均包含lo+连锁群，分别包括194个和132个标记，覆 盖基因组长度分别为563．3和559．1cM。 4．分别在两个不同的季节针三个永久性群体及亲本进行了硫甙的检测，发现硫甙在群 体中存在变异。QTL检测结果显示，6个QTL控制脂肪族硫甙的积累，2个QTL控制总吲 哚族硫甙的积累。进一步根据侧翼的Indel标记和SSR标记将以上8个QTL锚定在相应的 物理图谱上。并明确了QTL位点的14个硫甙生物合成基因。并初步推断BrMAM和BrAOP 可能在控制白菜硫甙的积累过程中起着关键作用。 5．分析25份不同来源的白菜类作物(包含作图群体的4个亲本)重测序数据，发现白 菜中硫甙生物合成基因存在丰富的多样性。平均每份材料中63．1％的硫甙基因存在SNP位 点，同时26．5％的硫甙生物合成基因存在Indel，但是绝大多数都分布在内含子区，引起错 义突变或移码突变的SNI和Indel所占比例极低。 6．根据20份重测序样本的硫甙数据，分析了硫甙基因的变异与硫甙积累的相关性，共 发现15个硫甙基因与硫甙的积累关系密切。对四个作图亲本QTL位点硫甙基因的变异分析 结果认为BrMAM3剪切位点的SNP可能是高硫甙亲本与低硫甙亲本间硫甙存在差异的根本 原因。 关键词：白菜类作物，硫代葡萄糖甙，比较基因组学，遗传连锁图谱，数量性状位点 Ⅱ Abstract Brassica a of andoilseed all ofthe rapa,includingvarietyvegetable crops，isimportantspecies Brassfcawith nutritional inAsia．Withthe of genus good value，especially gra