茶树悬浮细胞培及儿茶素生物合成的研究.pdfVIP

摘要 KT 2，4-0+0．1mg／L 本论文以云南大叶种春梢嫩叶为外植体材料，以B5+O．5mgflL 为培养基，诱导愈伤组织。经多次继代培养后取琉松的愈伤组织迸行悬浮培养，优 化了培养条件并最终建立悬浮细胞系。同时探讨了理化因子和诱导子对悬浮细胞生 长及儿茶素含量和组分的影响。主要研究结果如下： 1．研究了不同因素对茶叶愈伤组织诱导的影响，结果表明：Ms和B5培养基只在 愈伤组织形成前期有差异，B5培养基的诱导效果较好，但一周后无明显差异：外植 体中，以种子诱导愈伤组织的诱导率最高，可达80％以上；春季愈伤组织诱导率高 于秋季；与暗培养相比，光照12小时可明显减少褐化，但长期光照抑制愈伤组织的 诱导及生长，愈伤组织较致密，而暗条件下的愈伤组织较松散，适合于细胞悬浮培 养。 2．采用正交试验设计，研究了不同摇床转速、装液量、接种量对茶叶悬浮细胞生 长和儿茶素产率的影响，结果表明80rpm摇床转速、30ml装液量、19接种量为茶细 胞悬浮培养的最适条件。在最适茶细胞悬浮培养条件下，测定了细胞增长速度、儿 茶素累积以及底物消耗，绘制了生长曲线。其最高细胞干重增殖率为3．77倍，悬浮 茶素组分中只有EGC、EC和ECG。 3．研究了光照和蔗糖理化因子对茶树悬浮细胞培养中细胞生长、儿茶素的累积影 响。结果显示：当处于对数生长期的悬浮细胞进行光照处理后，其细胞鲜重和干重 茶素累积的均有明显增进作用，细胞鲜重、干重和儿茶素含量分别比cK提高了 EGCG。 悬浮细胞培养中细胞生长、儿茶素累积的影响。lmg／L YE对细胞的生 MJ和5mg／L 长略有影响，但促进TJL茶素的积累，它们的儿茶素含量分别比cK提高了78．02％ 和71．10％。lmg／L MJ处理的悬浮细胞中+C含量是鲜叶的203％，而Ec只有对照的 化过程；另外，EGC含量比对照提高了12．75倍，已经达到鲜叶的81．75％，却仍然 未检测到EGCG，其中的机理不清楚。 5mg／L 子化过程。 水杨酸对悬浮细胞生长及儿茶素的累积影响不大。 关键词：茶叶儿茶素愈伤组织悬浮培养诱导子 Ⅱ Abstract sinesisYunnan at thetendertealeavesofcamellia Dayezhonggrowingspring Using medium as teacalluswasinduceelwithB5culture 2，4一D explant，the adding0．5meJL and KTAfterseveral calluswasobtainedandusedto 0．1mlCL subcultures,soft cellwas culturecondition．The developedbyoptimizing suspensioneulure．Suspension elicitorsonthe of effbctsofsome andchemicalfactorsand phyrsical