黄瓜cdpk基的克隆及遗传转化.pdfVIP

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黄瓜cdpk基的克隆及遗传转化

fJJ||fIfIJ JJJf|…IJIJI洲||IIJJ||f|IJJII『JJI|I 29567 皇曼寰曼皇舅量曼曾量皇曼曼曼璺量鼍置量置量曼量曼寰曼曼!曼曼曼皇曼皇皇皇曼舅舅量 一’’’o’0-一 —————————————』o乙———一:Y2I 目 录 摘 要………………………………………………………………………………………………………………………….I 英文摘要……………………………………………………………………………………….1lI l绪 论………………………………………………………………………………………………………….。……….1 1.1研究的目的和意义……………………………………………………………………………………。l 1.2国内外研究进展……………………………………………………………………………….1 1.2.1f氐氮胁迫的研究进展……………………………………………………………….1 1.2.2植物钙依赖蛋白激酶的研究进展……………………………………………………3 1.2.3黄瓜遗传转化的研究进展………………………………………………………….4 1.3研究内容……………………………………………………………………………………一6 1.4试验的技术路线………………………………………………………………………………6 2材料与方法……………………………………………………………………………………7 2.1CDPK基因的克隆与表达分析……………………………………………………………7 2.1.1试验材料…………………………………………………………………………….7 2.1.2试验方法……………………………………………………………………………7 2.2CDPK基因遗传转化载体的构建………………………………………………………..1l 2.2.1CDPK基因的表达载体的构建与验证……………………………………………..11 2.2.2采用冻融法将CDPK表达载体导入农杆菌………………一:…………………….1l 2.3CDPK基因对黄瓜和拟南芥的遗传转化……………………………………………….12 2.3.1黄瓜遗传转化…………………………..……………………………………………….12 2.3.2拟南芥遗传转化………………………………………………………………….14 2.4抗性植株分子生物学检测………………………………………………………………15 2.4.1试验材料…………………………………………………………………………。l5 2.4.2试验方法………………………………………………………………………….15 3结果与分析………………………………………………………………………………………17 3.1G叫Ⅸ基因的克隆……………………………………………………………………………………l7 3.1.1黄瓜总RNA的提取………………………………………………………………………….17 3.1.2 CDPK基因的扩增与序列分析……………………………………………………………17 3.1.3CDPK基因表达分析…………………………………………………………………………。24 3.2CDPK基因表达载体的构建与验证……………………………………………………。25 3.2.1CDPK基因表达载体的构建………………………………_………………………25 3.2.2 CDPK基因表达载体的PCR鉴定与酶切鉴定……………………………………26 3.2.3 CDPK基因表达载体导入根癌农杆菌……………………………………………27 3.3CDPK基因对黄瓜的遗传转化及抗性苗的检测………………………………………。29 3.3.1植株再生……………………………………

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