木糖对多年生黑麦草愈伤组织生长的影响.pdfVIP

草业科技创新与草业发展 木糖对多年生黑麦草愈伤组织生长的影响 毛萍L2，杨宏1，蒋彬3，乔定君L2，邓霄禹3，胡可L2，马欣荣p (1．中国科学院成都生物研究所，成都，610041； 2．中国科学院研究生院，北京，100049；3．成都大学，610106) 摘要：木糖被认为是生物安全的选择试剂。为探讨木糖异构酶基因能否作为筛选标记在多年生黑麦草 遗传转化中运用，本论文以成熟种子诱导出的愈伤组织作为外植体，研究了木糖作为碳源对多年生熙麦草 愈伤组织生长的影响，培养5周后观察分析结果。研究显示，在愈伤组纵继代培养摹(SM)中分别添加蔗 糖、木糖以及不bd配比蔗糖，本糖的条件下，愈伤组织生长状况不同。结果表明：1)糖浓度在o--309n．，的 同等糖含馈条件下，愈伤组织生长量随着糖浓度的增加而增加，且在添加蔗糖的培养壁中生长明显优于在 木糖中：2)在混合糖培养中(糖总繁为309，L)，愈伤组织的生长蹙高于对照，但随着蔗糖最减少、木糖蹙 增加，愈伤组织生长量下降。研究表明，木糖能显著影响多年生黑麦草愈伤组织的生长，使其生长受到较 大程度地限制。在SM+59／L蔗糖+259／L木糖和只含有309n。木糖的培养基中，愈伤组织，E长量最低。推测 可用以上两种木糖浓度的培养基作为以多年生黑麦革愈伤组织为外植体的木糖筛选体系的筛选压． 关键词。多年生黑麦草，愈伤组织，木糖，蔗糖，正向选择，生物安全 随着转基因技术的发展、转基因作物种植面积的扩大和转基凶产品商品化程度的加深， “转基因”以及其衍生物的生物安全性引起了政界、商界、产、lk界、学术界和民众的J“泛关 注和深入讨论。其中，转基因植物投放大田，因选择标记基凶的存在而产牛的安全性问题是 争论中的焦点【lzJ。目|；if，已经有超过50种标记基冈川于科研和商业，而传统的选择标记基 因，如抗生素和除草剂等抗性筛选基冈，在很多国家和地区对其持有怀疑态度，认为它们的 存在会对人类健康、食品安全和生态环境带来威胁。冈此，选择合适的、安全的、有效的标 记基因，是摆在转基因科研人员眼下的难题，也是必须要解决的技术问题之一p’4。。糖类代 谢酶标记基因显示出了巨大的应用潜力。它们的编码产物是某种糖类的分解代谢酶，转化细 胞能利用选择剂糖类作为主要碳源，可在选择培养基上生长扩增，而非转化细胞冈不利用选 selection 择剂糖类，处于饥饿状态，生长受到抑制但不被杀死，被称为正选择系统(positive system)[51。由于非转化细胞不被杀死，从而避免了死亡细胞所释放的有毒代谢物对转化细 胞的不利影响，并且选择剂无毒副作用也有利于转化细胞的再生，所以一般正选择系统都可 以取得较高的转化率IoJ。 木糖异构酶(xyloseisomerase，xylA)基因编码木糖异构酶，大部分植物细胞不能以木 糖作为碳源， 但可以D-木酮糖作为主要碳源。木糖异构酶能催化D．木糖转化为D．木酮糖， 然后再经过磷酸戊糖途径分解代谢，为细胞生长所利用。在以肌木糖为筛选剂的培养基上， 转化细胞能将D．木糖转化为D．木酮糖而获得优势生长，非转化细胞冈缺乏碳源而被抑制生 长。早在1998年，Haldrup等用以D．术糖为惟一碳源的培养基筛选转化的马铃薯、烟草和西 红柿等植物细胞，成功地获得了转基凶植株，且在马铃薯和西红柿的转化中，获得了比用npt 108) 基金项目：国家863计划项目(2008AAIOZ409)(2009AAIOZ 作者简介：毛萍(1986-)，女，汉，在读硕士研究生，主要从事植物基因工程研究 通讯作者：马欣荣(1966-)，女，汉，博士．副研究员，主要从事植物基因工程研究 联系电话：028maxr@cib．ac．cII． ’联系地址：四川省成都市人民南路四段九号，中国科学院成都生物研究所农业中心 176 革业科技创新与草业发展 II基因作为筛选标记基因时高几倍的转化效率[71。张晓东等人也认为，以木糖作为筛选剂，可 以减小潜在的生物安全隐患。该研