红树林内生放线菌I07A-1824发酵液中杀线虫活性成分的分离、纯化与鉴定.pdfVIP

红树林内生放线菌107A一1824发酵液中杀线虫活性成分的 分离、纯化与鉴定 陶玲孙承航刘少伟郭琳靳婧刘佳萌 (中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所，北京，100050) 摘要： 目的建立稳定有效的杀线虫模型，并从红树林植物木榄内生放线菌107A．1824的次级代谢产物 中分离纯化得到具有强杀线虫活性的物质，对其进行结构鉴定。 方法利用硅胶层析法、高效液相色谱 法等方法对发酵液进行分离纯化，得到高纯度的强杀线虫物质；利用光谱分析对其进行结构解析，确定其 结构。 结果红树林内生放线菌107A．1824次级代谢产物中具有杀线虫活性的为一不饱和脂肪酸，经鉴 结论此不饱和脂肪酸对线虫有极强的致死作 定为5，8．二烯十四酸。其24h后的LC50值为162．8ppm 用，并且在内生放线菌107A-1824菌株的次级代谢产物中稳定存在，具有广阔的应用价值和开发前景。 关键词： 木榄 内生放线菌不饱和脂肪酸杀线虫活性 对这类生物的关注主要包括三方面：一是作为模式生物的秀丽隐杆线虫(Caenorhabditiselegans)：它已经成 为现代发育生物学、遗传学和基因组学研究的重要模式材料；二是对植物造成严重损失的植物病害线虫以 及最后一方面是对能寄生于人体内的管圆线虫的关注。植物病害线虫主要有根结线虫、胞囊线虫、松材线 虫等，它们主要寄居在植物体的不同部位，一方面汲取植物的营养，造成植物生长发育的障碍：另一方面 在寄居的同时，造成植物表面的伤口，从而促使了其他病原菌、病毒的侵入，导致植物病害死亡。据不完 全统计，每年由于线虫危害引起的农作物损失达10％．15％，仅根结线虫每年造成的重要经济作物损失达数 百亿美元[1-2]。管圆线虫为一种动物寄生虫，可侵入人体，寄生在人的中枢神经系统引起嗜酸性粒细胞增多性 脑膜脑炎，其中间宿主为福寿螺，近几年我国南方多次暴发由食用福寿螺引起的管圆线虫病【3】。 无论对于给农业带来巨大影响的植物病害线虫还是对于危害人类健康的管圆线虫，目前市面上均未出 现效果良好的杀线虫剂。本研究希望通过以实验室研究较为成熟的模式生物秀丽隐杆线虫为活性先导，从 特殊生态中得到的红树林内生放线菌107A．1824的次级代谢产物中分离纯化得到具有良好杀线虫作用的物 质，并对其结构进行分析鉴定，希望本研究的发现对于直接用于线虫防治或作为开发人工合成类似物的先 导化合物有一定的推进作用。 众所周知，放线菌是抗生素的重要来源，约50％的抗生素是由放线菌产生的。本文报道了从特殊生境 得到的红树林内生放线菌107A．1824的次级代谢产物中分离纯化得到具有强杀线虫活性的物质，并通过常 规波谱分析手段对其进行结构鉴定，最终确定活性物质为5，8一二烯十四酸(图1)。 HO CH3 图1 5,8烯十四酸的结构图 22I 1 材料与实验设备 1．1材料 1．1．1 菌种 浅灰白色菌落，无可溶性色素生成【51。目前保存于中国医学科学院医药生物技术研究所国家药用微生物菌 种保藏中心。 1．1．2 供试线虫 秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis (Rhabditidia)，小杆总科(Rhabditoidea)，由福建大学提供。 1．1．3 主要试剂 (1)化学试剂：环己烷、乙酸乙酯、甲醇等均为北京化工厂生产的分析纯试剂(中国) (2)柱层析正相硅胶：青岛海洋化工厂，100．200目(中国) (3)柱层析反相硅胶：MerckRP．8，40．60 lam(美国) (4)分析型薄层色谱铝箔硅胶板及制备型薄层色谱玻璃硅胶板：Merck60GF254，(美国) BurdickJackson色谱甲醇(美国)；屈臣氏纯净水(中国) (5)HPLC试剂：Honeywell 1．1．4 培养基 1．1．4．1 红树林内生放线菌培养基