高尔基体中糖基转移酶信号介导动态保留.docVIP

高尔基糖基转移酶信号动态保留Linna Tu, William C. S. Tai,* Lu Chen, David K. Banfield? 高尔基糖基转移酶是一种酶家族的具体方式蛋。第二类组成，这些膜蛋白的特点是短期暴露细胞质氨基末端尾巴和一腔酶域。细胞质尾巴发挥本地化的糖基转移酶的作用，外壳蛋白复合物COPI泡介导的逆行运输也在高尔基工作。然而，这些酶缺乏的尾巴COPI序列。在这里，我们发现Vps74p绑定到在多数的酵母细胞质尾巴主题目前高尔基本地化的糖基转移酶，以及COPI。我们建议Vps74p保持稳定，高尔基州的糖基转移酶动态定位到COPI通过促进其纳入小泡。 在高尔基体的功能，作为新合成的蛋白质分拣中心和作为糖蛋白的翻译后修饰的位置。蛋白糖基化是发起的内质网（ER）。糖蛋白，然后经过由高尔基组本地化广泛的顺序糖基转移酶糖链伸长和阐述介导的。虽然他们独特的催化糖基化反应，并显示脑池的分布特点，高尔基居民糖基转移酶都是II型膜蛋白组成的短期暴露细胞质N末端（尾）组成一区，一催化结构域。??Avariety的功能已确定了影响这些酶（1-3）：在跨膜区（4-8），的面向非催化区（6,8），催化域之间的相互作用（9，10）和细胞质 尾（11-13）。稳态这些酶的分布状态维持一个动态的过程，它涉及到从早期池的检索，以及与高尔基和，于是他们过境回到池对它们的功能（14，15 ）。虽然糖基转移酶的功能，直接的一个特定的酶一池或另一稳态变化，大概外壳蛋白复合物（COPI），小泡是由其中这些酶大部分被回收（14，16的主要手段） 。然而，高尔基居民糖基转移酶缺乏规范COPI在其细胞质尾巴结合基序，我们设法查明的蛋白质，可以结合 这些酶的尾巴，COPI可以促进其纳入小泡。水溶性N -乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体），Sft1p，高尔基内的（17）逆行运输所需的一种蛋白质。 Vps74p是一个蛋白质家族，其中包括哺乳动物蛋白GPP34（GmX33a）和GPP34R（GmX33b）（18-21）的成员。虽然VPS74删除了对酵母细胞生长无明显影响，vps74D细胞已知羧肽酶Y，这 Vps74p参与蛋白质（22）。我们注意到，vps74D缺陷细胞中的糖基（GPI）的处理锚定蛋白Gas1p。 Gas1p是修改增加了N -和O -连接碳水化合物，因为它穿越途中的高尔基体与细胞表面（图1A）（23）。在酵母中的Gas1p缺乏N中所涉及的酶菌株命运的比较和Oglycosylation揭示了在缺乏的A1 ,2 - mannosyltransferase，Kre2p（图1，A和B）（24）细胞类似的加工缺陷。我们考虑到Vps74p可能需要Gas1p运输和审查功能Gas1p贩运单体的可能性红色荧光蛋白（Gas1p - mRFP）融合蛋白在细胞缺乏Vps74p（25）。然而，Gas1p位置在vps74D细胞mRFP是无法区别的，在野生型细胞（图1c）。 像GPP34（18），Vps74p是一个外周膜蛋白（图1，D和E），因此，只会有能力直接的物理与细胞质相互作用面向N端11个氨基酸的Kre2p。我们建造了一个混合体，其中蛋白质的Kre2p的细胞质和跨膜区域融合到N -端mRFP结束（Kre2CT - mRFP）。在野生型细胞，Kre2CT - mRFP是局部的无数小点在整个细胞质中，这部分的重叠，绿色荧光蛋白（GFP）融合到高尔基体，居民蛋白质，Rer1p（绿色荧光蛋白- Rer1p）（图1楼）。此外，由于不Rer1p（26）和Mnn9p糖基转移酶复合物（16），高尔基体Kre2CT -绿色荧光蛋白循环通过COPI依赖机制（图中一）。在vps74D细胞，但是，Kre2CT - mRFP是定位于液泡（图1）。这种效果是不是因为在高尔基保留一般不足驻地膜蛋白，因为绿色荧光蛋白本地化Rer1p到高尔基没有受到影响。这些调查结果是一致的为Vps74p的Kre2p在高尔基体的动态保存的作用，并确定了N -端11个氨基酸的蛋白质为保留足够的调解。 ???酵母基因中，尤其是在糖基化涉及被删除细胞显示减少了在场的可行性calcofluor白（连续）。细胞缺乏VPS74更为敏感，连续超过kre2D细胞（图中二），所以我们推断，Vps74p调解可能增加糖基转移酶的高尔基本地化。当VPS74从表达Mnn9 -绿色荧光蛋白，Mnn2 -绿色荧光蛋白，或Ktr6CTGFP菌株删除，这些蛋白的确，要么一泡状烟雾（Mnn9 - GFP）的，或对液泡（Mnn2 - GFP和Ktr6CTGFP） （图2A）条。对齐的N端 对酵母糖基转移酶家族成员细胞质尾巴暴露了一semiconserved motif (F/L)-(L/V)-(S/T)（27）在 对家庭的一些成员的（表1）细胞