ZNF580在ROS介导的内皮细胞炎症反应中的作用的研究.pdf

Y1900561 目 录 中文摘要………………………………………………………………………l 英文摘要………………………………………………………………………4 研究论文zNF580在ROS介导的内皮细胞炎症反应中的作用研究 前言………………………………………………………………………7 日IJ青…．…………………………………………………………………．．， 材料与方法………………………………………………………………8 结果……………………………………………………………………25 附图……………………………………………………………………29 附表……………………………………………………………………39 讨论…………………………………．………………………………．．40 结论……………………………………………………………………42 参考文献………………………………………………………………43 综述ROS在动脉粥样硬化发生中的分子机制研究进展………………48 致谢……………………………．…………………………………………．．61 个人简历……………………………………………………………………62 中文摘要 ZNF580在ROS介导的内皮细胞炎症反应中的作用研究 摘 要 乃盯580是由本课题组克隆的一种新的锌指蛋白基因，该基因定位于 (Knppel．1ikefactors，Kl盘)家族成员类似，其功能仍在进一步研究中， 本实验旨在探讨zNF580在ROS介导的内皮细胞炎症反应中的信号转导机 制。 目的： 以人脐静脉内皮细胞株(EA．hy926)为体外模型，在典型的活性氧 (reactive0Xygen 录因子NF．KB转录激活之间的关系，以及D旺580基因过表达对炎症因子 的内皮细胞炎症反应中的作用。 方法： 培养基在37℃、5％C02、饱和湿度下培养。 2 膜完整性的重要检测指标。为确定H202对内皮细胞的损伤情况，不同浓 LDH活性检测分析H202对内皮细胞的损伤作用。 胞培养液中，浓度约为5．6×106／ml，接种到六孔板中2ml／孔，37℃，5％C02 OuM、50uM、loouM、200uM、300uM、 孵箱培养。在各孔内加H202 400 uM，每组设三个平行孔。1h后收集细胞，提取总对妊和蛋白，利 用半定量肼PCR、W，estem ’ 的影响。 中文摘要 W．estem b10t方法检测不同作用时间的H202对zNF580表达的影响。 5内皮细胞经不同处理后，实验分为对照组、H202处理组、PDTC干预组 和DMSO对照组。各组细胞爬片后固定，免疫细胞化学检测H202和特异 性抑制剂PDTC对NF．曲亚基p65激活表达的影响。 6同样EA．hy926细胞分为不同的处理方式，抽提l矾A以及蛋白，利用半 定量RT-PCR扩增和Wrestem 路影响和调节勾师580的表达。 8运用real-timePCR技术从转录水平检测构建的瞬时高表达ZNF580内皮 细胞和正常内皮细胞中白介素．8的表达差异。以ELISA方法从蛋白表达 水平检测构建的瞬时高表达ZNF580内皮细胞和正常内皮细胞中白介素一8 的表达差异。 9人急性单核细胞白血病细胞株(，n口．1)，用含10％胎牛血清的 析瞬时高表达D师580内皮细胞和正常内皮细胞中IL．8对单核细胞株 TI口．1迁移率的影响。 结果： LDH测定结果显示，H202浓 l不同浓度H202作用于EA．hy926细胞， 度为400州时，LDH的释放量最大。 在mRNA转录水平和蛋白水平的表达均有增加，并呈现浓度依赖的趋势。 (氏O．05)。在浓度为100山时，刁虾580的表达最高。 在刺激时间为1h时，刁师580的表达最高。 ． 4