【医学ppt课件】去壁低渗法制备植物染色体标本.pptVIP

去壁低渗法制备 植物染色体标本 实验目的 掌握植物染色体标本制备的去壁低渗方法 了解中期染色体的形态结构 实验原理 植物细胞有很坚实的细胞壁，染色体很难像动物染色体那样平整地贴在载玻片上，可通过纤维素酶和果胶酶处理去掉细胞壁；用低渗溶液处理可以提高染色体的分散程度。陈瑞阳等（1979，1982）提出了植物染色体标本制备的酶解去壁低渗法，并在多种植物上得到广泛应用，成为当前植物染色体研究中的重要方法。 实验用品 1.材料 大麦或玉米种子 2.用具 显微镜；温箱；冰箱；重蒸水；眼科镊子；刀片；牙签；载玻片；试剂瓶；三角瓶；量筒；酒精灯；青霉素小瓶 3.药品 0.2%秋水仙素溶液 ；磷酸缓冲液pH7.6 ；3-5%Giemsa染色液；0.075mol/L氯化钾；混合酶液：称取纤维素酶，果胶酶各0.5g,加入20ml蒸馏水即为2.5%混合酶液,冰箱内冰冻保存；卡诺固定液 实验步骤 1、材料培养：将玉米或大麦的种子充分后，摆在铺有滤纸的培养皿内，在25℃温箱发芽培养 2、预处理：待根长至0.5-1cm时,切取根尖立即放入盛有1ml0.2%秋水仙素的小瓶中预处理2-3小时 3、前低渗：切取分裂旺盛的部分根尖（1mm），放入0.075mol/L氯化钾低渗液中，在25℃条件下处理30分钟。以下可分两种方法进行处理 4、经过上述两种方法处理的材料,可用两种方法制备染色体标本 1）第一种方法,涂片法: （1）固定：将后低渗好的材料，直接用甲醇：冰醋酸（3：1） 固定液固定30分钟以上 （2）涂片：将材料放在预先用蒸馏水浸泡并冷冻的清洁载玻片上，加1滴固定液，然后用镊子迅速将材料夹碎涂布，并去掉大块组织残渣 （3）火焰干燥：立即将载玻片在酒精灯火焰上微微加热烤干 实验步骤 2）第二种方法，悬液法： （1）制备细胞悬液：倒去双蒸水，用镊子立即将材料夹碎形成细胞悬液 （2）固定：向细胞中加入新配制的甲醇：冰醋酸（3：1）固定液1-2ml，使成细胞悬液 （3）去沉淀：静置片刻使大块组织沉淀，然后取上层细胞悬液于另一个小瓶中。 （4）去上清夜：将上层细胞悬液静置30分钟左右，即可见细胞沉淀，用吸管轻轻吸去上清夜，留约0.5ml左右细胞悬液置备标本 (5)标本制备:在一张经过充分洗净脱脂,并预先在蒸馏水中冷冻的清洁载玻片上,用吸管滴2-3滴细胞悬液,立即将载玻片一端抬起,并轻轻吹气，使细胞迅速分散，然后在酒精灯火焰上微微加热烤干。 5、经干燥的玻片标本，用Giemsa染色液染色30分钟，然后用自来水细流冲洗，甩干水珠空气干燥。 6、在显微镜下寻找典型的中期染色体，注意观察中期染色体的长臂、短臂和着丝粒位置，并尽可能找到具随体染色体。 作业 中期染色体具有哪些形态特征？ 绘制一完整细胞并带有随体的中期染色体图 * * *