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核酸杂交酶联桥接分析统在寡核苷酸定量分析中的应用.pdf
( )
第 40 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 研究 第期
2012 年月 Chinese Journal of Analytical Chemistry ~
: /
DOI 10.3724SP.J.1096.2012.10435
核酸杂交酶联桥接分析系统在寡核苷酸定量分析中的应用
孙云娟 付 洁 王清清 周 磊 董立厚 欧 伦 高 新 宋海峰*
( , , )
军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室 药代动力学重点实验室 北京 100850
( ) ,
摘 要 建立了基于核酸杂交及连接酶和核酸内切酶的酶联桥接分析 ELBA 系统 用于生物基质中反义寡
( ) 。 、 、
核苷酸 ODN 药物的定量分析 对 ELBA 系统中的亲和素包被 俘获探针/检测探针浓度 T4 DNA 连接酶及
、 ,
S1 核酸酶用量 碱性磷酸酶底物反应时间等条件进行了优化 确定使用中性亲和素包被的酶标板, 俘获探针
, , ,
与检测探针浓度比为 2 3 S1 酶为 40 U/孔 显色 15 min 为最优条件 并考察了生物基质效应和稀释效应对方法
∶
, ,
的影响 建立了猕猴血浆中反义寡核苷酸的定量方法, 并进行方法学确证 方法学定量范围为 0. 10 ~
。 ( ) ,
6.25 nmol/L 本方法成功应用于反义硫代寡核苷酸药物在低剂量 1 mg/kg 静脉滴注后的药代动力学研究 成
为生物基质中寡核苷酸类药物定量分析的有效手段。
; ; ; ;
关键词 寡核苷酸 药代动力学 定量 核酸杂交 酶联桥接分析系统
引 言
1
( , ) ( , )、 ( ) ,
反义 Antisense AS 寡核苷酸 Oligodeoxynucleotide ODN 免疫刺激基序 CpG ODN 等分子 在抗
、 。 ,
肿瘤 抗病毒治疗等基因治疗领域中占据重要地位 迄今 AS ODN 与 CpG ODN 类药物经美国FDA 批
-
[1,2]
, 。
准上市 已有多种该类药物处
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