RealtimePCR原理和应用.pptVIP

Realtime PCR的原理、问题及解决方法 Yang Sun, PhD Product Specialist 主要内容 Realtime PCR的原理 Realtime PCR的问题及解决方法 Realtime PCR的应用 定量起始模板浓度 等位基因的鉴定 产物鉴定 SNP分析 病原菌检测 药厂GMP认证 突变测定 物种鉴定 Real Time PCR的概念 Real time PCR 在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实现了实时监测整个PCR进程，对起始模板进行定量分析的方法。 Real Time PCR的概念 PCR的原理 PCR的原理 PCR的原理 理想的PCR反应： X=X0*2n 非理想的PCR反应： X=X0(1+Ex)n n：扩增反应的循环次数 X：第n次循环后的产物量 X0：初始模板量 Ex：扩增效率 在扩增产物达到阈值线时: XCt=X0(1+Ex)Ct=M (1) XCt:荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量. 在阈值线设定以后,它是一个常数,我们设为M 方程式(1)两边同时取对数得: log M=log X0(1+Ex)Ct(2) 整理方程式(2)得: log X0= -log(1+Ex) *Ct+ log M (3) 最后结论： Log X0与Ct呈线性关系，根据样品扩增的Ct值就可计算出样品中所含