北京油鸡α-干素的克隆和表达研究.pdfVIP

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2016-02-20 发布于贵州
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北京油鸡α-干素的克隆和表达研究.pdf

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北京油鸡α-干素的克隆和表达研究

摘要本论文以北京油鸡肝脏总RNA作为模板，通过RT-PCR方法克隆a一干扰素目的基因片段连接到pGEM．TEasy载体上，构建北京油鸡克隆载体，再利用双酶切法构建北京油鸡真核表达载体pEGFP．CI．a-IFN，并把真核表达载体转染到蒙古马和阿勒泰羊耳缘组织成纤维靶细胞中表达。所得试验结果如下：因，片段大小为582bp，并提交基因序列于GenBank获取收录号。 2．采用组织块贴壁培养法对蒙古马和阿勒泰羊耳缘组织成纤维靶细胞进行原代、传代培养及冻存，并对其进行细胞活率、生长曲线、微生物污染、染色体核型、同工酶酶谱和绿色荧光蛋白外源基因表达等鉴定，得到了细胞生长健康，形态良好，未受别种细胞污染，遗传性能稳定，外源基因转染的细胞形态和生长状态良好的靶细胞。并在靶细胞中的表达结果显示：蒙古马转染72时，转基因表达率最高达到39．42％：阿勒泰羊转染48小时，最高的表达率为40．21％。绿色荧光均匀的分布于整个靶细胞，呈弥散分布，说明a-IFN在整个靶细胞中有均匀表达。关键词：转基因；a_干扰素：成纤维靶细胞：基因克隆：真核表达：北京油鸡 onthe c andFunctionofa—IFN of Study geneloning gene Chicken BeijingFatty ^bStract Inthis madethetotal paper，we RNAofliverfrom Chickenasa BeijingFatty toPGEM-T RT·PCRandconstructed template，clonedtargetgenes Easythrough Chicken’S vectorof BeijingFatty PGEM·T·a-IFN．constructed cloning BeijingFatty Chicken vector the methodofdoublerestriction expressionpEGFP··T·ct-IFNthrough enzyme，and in cells．Theresultsasfollows： expressiontarget 1．wemadethetotalRNAofliverfrom Chickenasa clone BeijingFatty template，to chickenct-IFN RT-PCR sizeof582 the genethrough method，a bp，andgenesequences submittedtoGenBank． 2．wemadefibroblastcellsof horseandaletai cultivateddirect Mongolian sheep by adherentculturemethodsas the rateof cells，and