华南地区口蹄疫行毒株vp1基因核苷酸序列分析及fmdv衣壳蛋白前体p1在fcv中的表达.pdfVIP

华南地区口蹄疫流行毒株VPl基因核苷酸序列分析及FMDV衣壳蛋 白前体P1在FCV中的表达 摘要 andmouth andmouth 口蹄疫(Foot disease)是由口蹄疫病毒(Foot diseaSe villJs)引发的感染猪、牛和羊等偶蹄动物的一种急性、热性、高度 接触性人兽共患疾病。其易感动物种类多、传播速度快、流行范围广、难 以防治，严重降低家畜生产性能并影响国际间动物及畜产品的贸易。目前， 国内主要采取疫苗免疫进行防制。 苷酸序列同往年华南地区的流行株及参考株的VPl核苷酸序列进行比对分 析，并建立遗传进化树。结果显示，0．ST-2010毒株同我国分离株O 92．2％．83．3％之间，而与其他基因型的毒株的相似性均在85％以下。且同 往年华南地区的流行株，在拓扑型上分类并不属于同一谱系。往年华南地 区的流行株为新猪毒系或泛亚系毒株(属于古典中国型或中东．南-哑型)，而 O—ST．2010毒株为云南耿马系(属于东南亚型)。当前我国使用的疫苗株均 为古典中国型或中东．南亚型，尚无针对东南亚型毒株的疫苗。流行毒株基 因型的改变，意味着病毒抗原性的改变。导致华南地区当前使用的疫苗保 护力降低，使得华南地区口蹄疫的防控面临严峻的形势，尽快研制出针对 东南亚型毒株的疫苗迫在眉睫。 为了评估FCV作为基因工程载体的可行性，开辟FMD重组活载体疫 链砌姒病毒，基因组大小约为7．8kb，属于杯状病毒科囊病毒属的成员， 3C 是猫科动物中广泛流行的高度接触传染性的重要病原体。为了验证FCV 样蛋白酶识别基序是否为8个氨基酸，将FMDVP1内部的蛋白酶切位点突 变为FCV3C样蛋白酶的识别基序，即蛋白酶切位点处的N端和C端各4 个氨基酸共8个氨基酸序列。将突变后的P1基因即PlM2分别插入到FCV 感染性克隆载体的前导蛋白LC中及LC后的位点，构建成重组病毒载体 Pl基因在FCV中的 表达，并比较重组FCV同亲本FCV的复制生长动力学。结果显示，两个嵌 合体病毒皆能引起细胞病变；间接免疫荧光检测转染细胞有荧光产生：转 P1 泳结果显示有大小分别为83l(D和63m的目的条带，与设计的FMDV 蛋白及FCV衣壳蛋白大小正好相符，表明所设计的3C样蛋白酶能够对 P1M2进行酶切修饰，使FCV重组病毒表达独立的结构蛋白，识别基序起 具有反应原性；重组病毒m正CV-EA．P1M2同亲本毒的生长曲线基本一致， P1在FCV中成功获得表达，表明FCV作为表达外源基因的基因工程载体 应用前景良好，同时，也为研发口蹄疫重组活载体疫苗开辟新的途径。 关键词：口蹄疫病毒衣壳蛋白FCV嵌合病毒 GENE0F ANALYSI SOFVPl NUCLEOTI DESEQUENCES EXPRESSl 0N0FFMDV lNSOUTHERNCHI NAREGl 0NSAND DI SEASE CAPSl DPRECURSORP1I NFELI NECALI CI Vl RUS ABSTRACT mat Foot．and．mouthdiseaseisanacuteand zoonoticdiseaSe feVer_causing as