南林895杨转鼠金属硫蛋白(mt)基因研究.pdf

㈣㈣㈣㈣㈣ Y205021 0 摘 要 重金属污染是影响环境质量和生态稳定的主要问题之一，它不仅影响大气和 水环境的质量、农作物的生长，而且通过食物链严重危害动物和人类的健康。由 于重金属污染的广泛性及其自身不可降解的特点，治理起来十分困难。哺乳动物 高巯基含量的蛋白质，本研究以MT基因为目的基因，选择生物量大、生长迅速 的植物(南林895杨)为基因转移的靶植物，利用植物基因工程技术将目的基因 整合到靶植物基因组中，获得转MT基因杨树，用于富集污染土壤中的有害重金 属，从而达到修复生态，从源头上控制和减少重金属进入食物链，更大范围内防 治动物和人类重金属中毒发生的目的。 实验首先构建了带有小鼠金属硫蛋白(MT)基因的植物表达载体 法，展开了小鼠金属硫蛋白基因(MT)的植物遗传转化的前期研究，为最终获得 目的基因稳定遗传和高效表达的转基因杨树，利用MT结合重金属的特性富集污 染土壤中的重金属提供基础。 1、植物表达载体pCAMBIA2301．MT的构建 组，酶切和PCR鉴定表明质粒成功构建。 2、农杆菌转染后杨树叶盘脱菌用抗生素种类和浓度的确定 时，既不会影响南林895杨叶盘的分化效率，又能够有效抑制农杆菌的生长。 II 摘要 3、真空渗透法转染农杆菌条件的确定 根据农杆菌转染叶盘后GUS染色的结果，确定在杨树叶盘预培养3d，菌液浓 PCR检测，获得2株阳性苗。 4、gus报告基因的表达 Gus表达位点。 关键词：金属硫蛋f兰I(MT)基因；植物表达载体；南林895杨；gus报告基因 Abstract ABSTRCT metal isoneofthe affects main whichwill Heavy pollution problems and environmental not affectsthe qualityecologicalstability，thepollutiononly quality ofairand alsocausesserious water，the harmstothehealthofhuman crop粤owth,but andanimals thefoodchain．Thetreatmentis difficultbecauseofthe through very metal anditsown this widespreadheavy pollution non-degradable combinedwith metal in heavy study，Metallothioein(MT)whichonly animalswas as used