杀蝗绿僵菌生物药研制及其应用技术研究.pdf

Study on Locusticide of Metarhizium anisopliae Strain CQMa102 for controlling Locusts and its * Application Technology A Thesis Submitted to Chongqing University in Partial Fulfillment of the Requirement for the Degree of Doctor of Engineering by Peng Guoxiong Supervisor: Prof. Xia Yuxian Major: Biomedical Engineering College of Bioengineering Chongqing University Chongqing, China April, 2008 * This research was supported by National High Technology Research and Development Program „Project 863‟ of China ,Grant No. 2001AA246051 and No: 2004AA214050 中文摘要 摘 要 我国是世界上蝗灾发生最为频繁的国家之一，其中东亚飞蝗是导致我国蝗灾 发生的首要害虫。目前，我国蝗虫的主要控制手段是化学防治，化学农药大量长 期施用已经造成蝗区严重的环境污染，使蝗区生态平衡受到破坏, 蝗虫灾害的发生 与治理进入恶性循环。使用与环境友好的生物农药替代化学农药成为今后控制蝗 虫的重要发展方向。金龟子绿僵菌是一种昆虫病原真菌，具有安全、不杀伤非目 标生物、害虫难以产生抗药性等优点，在蝗虫生物防治中起着重要作用。杀蝗绿 僵菌生物农药作为国际蝗虫防治中最重要的可持续的生物防治手段，已被联合国 粮农组织(FAO)推荐为环保产品推广应用。我国尚无登记注册的真菌杀虫剂农药。 缺乏具有自主知识产权的杀蝗绿僵菌制剂是阻碍我国大规模应用绿僵菌制剂防治 蝗虫的主要原因之一。 真菌农药存在菌株选育困难、生产工艺研制滞后、缺乏质量控制体系等问题， 这严重制约着杀虫真菌制剂的生产、研发和检测，目前国际上只有两个杀蝗绿僵 菌生物农药登记注册。缺乏快速准确的毒力评价方法成为制剂研究的重要制约因 素之一。昆虫病原真菌的入侵速度与在寄主体增殖是寄主昆虫罹病死亡的前提， 其增殖数量及速率直接影响致病过程及杀虫效率。建立昆虫体内病原真菌的早期 定量检测方法，能满足菌株选育、制剂研制以及制剂质量评价对杀虫剂毒力评价 的需要，为我国杀虫真菌制剂的生产、研发和检测提供技术支持。 本研究以分离于自然感染黄脊竹蝗 Ceracris Kiangsu 的金龟子绿僵菌 CQMa102 为实验菌株，主要内容包括：a)CQMa102 的生物学特性研究；b)CQMa102 的固体发酵参数优化；c)制剂技术研究与环境安全性评价；d ）CQMa102 杀蝗制剂 田间应用技术研究；e ）东亚飞蝗体内绿僵菌的荧光定量PCR 检测体系的建立及应 用。主要研究结果如下： 1、通过与 IMI330189 非洲杀蝗菌株的生物活性、耐热性与抗紫外光线等生物 学特性比较研究表明：CQMa102 菌株对东亚飞蝗的生物活性高于 IMI330189 菌株， LT95 提前 1.3d；耐热性与抗紫外光线与对照菌株无显著差异。另外，CQMa102 对 蝗虫具有专化性。 2 、CQMa102 菌株固体发酵优化培养基为：以大米为发酵物料，按