桑树钙调蛋白基cdna克隆分析及桑属植物分子系统学研究.pdf

学 号： 文 摘： 桑树是多年生的重要经济作物，桑叶是家蚕的优良饲料。我国 作为世界蚕业的发祥地和起源中心，拥有世界上最为丰富的桑树种 质资源，是一个桑树资源大国。但是，与其它植物相比，我们在桑 树功能基因克隆等方面都处于落后状态。蚕业作为我国传统的优势 出口创汇产业，一旦主要桑树功能基因的控制权旁落它国，将对我 们的桑产业会造成不可估量的影响。所以，我们应该立足于我们的 资源优势，开展桑树功能基因挖掘研究。另外，利用丰富的桑树种 质资源开展桑属系统发育和分子进化研究，对丰富的桑树遗传资源 收集、整理、保存和创新利用有着重大意义。本文研究内容如下： 利用SMART 技术(Switching Mechanism At 5 end of RNA Transcript)构建丰驰桑幼苗cDNA文库，从中获得两个cDNA序列， 两条序列的读码框均为450 bp ，均包括完整的3端非翻译区；序列 比对分析发现，两条序列ORF(open reading frame) 同源性为86%， 核苷酸差异大多数发生在第3位密码子上；将其氨基酸序列与 GenBank上登陆的拟南芥ACaM-7等的氨基酸序列进行比对，同源 性均在98% 以上，说明是2 个钙调蛋白基因，命名为MCaM-1 ， MCaM-2 ；其中MCaM-1与拟南芥的CaM7、胡萝卜的CaM4 的氨基 酸同源性达100%。这表明钙调蛋白序列在植物中相当保守。 用PCR 产物直接测序法对桑科桑属、构属等属的 14 份材料的 trnL 基因内含子序列进行了测定：该序列长度变异范围为534~561 bp ；平均核苷酸组成为 0.39100(A) 0.27114(T) 0.17679(C) 0.16086(G) ，平均A+T 含量为0.66214 说明该序列富含A/T 。利用 rps16 基因内含子对桑科桑属、构属等属的20 份材料进行了分子系 统学研究，各供试材料rps16 基因内含子长度在887~922 bp 之间； 平均核苷酸组成为0.36055(A) 0.31305(T) 0.14215(C) 0.18435(G)，平均 A+T 含量为 0.67360, 说明该序列富含 A/T 。用软件对所得序列进 行分析并构建了其系统发育树。构建的两棵系统树均显示桑属所有 材料聚为一类，进一步证明桑属为单系，并探讨了桑属的亲缘关系。 用两个标记进行的分析结果有很多的相似处，但也有差异。 关键词： 桑树，钙调蛋白，SMART，trnL 内含子，rps16 内含子 Abstract ： Mulberry (genus Morus), grown as a perennial tree or shrub, is an economically important plant used for sericulture, as it is the sole food plant for the domesticated silkworm, Bombyx mori . As the homeland and origin center of the world sericulture, our country has abundant mulberry germplasm resources. Compared with other p