桑树高频再生体建立与遗传转化体系研究.pdfVIP

中文摘要 alba 桑树(MorusLinn．)属多年生双子叶木本植物，其叶片是家蚕(Bombyx mori L．)的主要天然饲料，人们以获取桑叶为主要栽培目的。同时，桑树也是 我国传统的药用植物。因此，桑树是我国重要的经济树种，也是蚕丝业可持 续发展的重要物质基础。 木本植物的遗传转化远远落后于大田作物和其他草本植物，其中一个重 要原因是木本植物组织培养和植株再生的难度较大，缺乏合适的转化受体材 料，难以建立高效稳定的遗传转化体系，其次是基因型依赖l生较强，转化效 率不高。在前人工作的基础上，本研究以农桑14号(简称农14)、育71．1、 陕305和大10四个桑品种冬芽为材料，建立了桑树高效再生体系并对其遗 传转化条件进行了优化，通过将p．葡聚糖苷酶(GUS)基因转入桑树对该体系 进行了检测，为桑树的遗传转化提供参考。主要研究结果如下。 1本文探讨了植物激素6-BA、NAA、2，4．D、琼脂、稀土元素镧以及桑 品种对桑树冬芽分化的影响，筛选出了适于桑树冬芽分化的最佳培养基为 MS+6-BA1．2 O．2 40 mg／L+2，4-Dm鲫．J+LaCl3mg／L，不同桑品种对桑冬芽分 化无显著性影响。 2采用正交试验设计，对影响桑树离体叶片再生的因素：植物激素TDZ、 NAA、6-BA、L～A及桑品种、苗龄、叶位等进行了研究，获得了叶片愈伤 1．0 组织诱导最佳培养基为：MS+TDZmg／L+NAA0．2mg／L；不定芽分化培 d的陕305试管 养基：MS+6-BA3．0mg／L+taa0．1mg／L，以选用苗龄为15 苗叶片，其愈伤诱导率最高达93．9％，不定芽分化率为98．33％，由此建立了 桑树高频再生体系。 对TDZ作用机理初步探讨结果表明，TDZ可抑制叶片的脂质过氧化作 用，保护细胞膜结构的完整性，阻止叶片叶绿素的降解，抑制POD的活性， 延缓离体叶片的衰老，提高了桑树离体叶片的再生效率。 3本试验在上述建立的桑树高频再生体系基础上，通过石蜡切片观察了 叶片愈伤再生来源。结果表明：愈伤组织的表皮由一层排列整齐、形状较小 的细胞组成。皮层由大小不等的薄壁细胞组成，排列很不整齐，不定芽发生 是从愈伤组织表皮和表皮下的细胞分生组织化发育而成，它是由表皮和表皮 下一团细胞核较大的小细胞组成，表明桑树叶片愈伤组织诱导的不定芽有被 VI 转化的可能。 4由于桑树属于木本植物，其遗传转化存在一定难度和特殊|生。通过对 影响转化效果的因子：菌液浓度(OD600)、菌液浸染时间、共培养时间、 选择培养基中Kan选择压和Cef抑菌浓度等进行了优化，结果表明当菌液 的Cef作抑菌物质时桑品种陕305转化率最高，获得了最佳转化体系。 5对优化的遗传转化体系进行农杆菌介导GUS报告基因转化，通过组 织化学染色和PCR检测，结果表明GUS基因已整合到植株中，遗传转化效 率为10．5％。 关键词： 桑树，高频再生，农杆菌，遗传转化，GUS VII ABSTRACT MorusalbaLinn．isa leaves dicotyledonouswoodyplant，its perennial aimto L。。SO leavesisthemain naturaldietsfor mori are Bombyx getting plant