六 色谱法精品.pptVIP

第一节 色谱法基础 色谱法：是一种物理或物理化学分离方法， 将混合物中各组分分离后在线或离线分析的方法。 色谱的发现 装有CaCO3的玻璃管叫做色谱柱 管内填充的CaCO3固定不动，称为固定相 用来淋洗色素的石油醚不断地往下流动， 称为流动相 第一节 色谱法基础 一、 常用术语 第一节 色谱法基础 1. 色谱图和色谱峰 色谱图：色谱响应信号随时间的变化曲线称为流出曲线或色谱图。 色谱峰：流出曲线上的突起部分称为色谱峰。有三种情况 第一节 色谱法基础 基线：在色谱分离过程中，没有组分流出时的流出曲线，即色谱图中无色谱峰的部分。 描述色谱峰的参数 ①峰位（用保留值表示，用于定性） ； ②峰高或峰面积（用于定量） ； ③峰宽（用于衡量柱效） 。 第一节 色谱法基础 2. 保留值 保留时间tR 从进样开始到某个组分色谱峰顶点的时间间隔称为该组分的保留时间。 死时间t0 分配系数为零的组分的保留时间称为死时间 调整保留时t R = tR- t0 组分在固定相中停留的时间称为调整保留时间 相对保留值r2,1= t R2/ t R1= V R2/ V R1 两组分的调整保留值之比称为相对保留值 第一节 色谱法基础 3. 色谱峰区域宽度 标准差 色谱峰上两拐点 （0.607峰高处）间距离一半 半峰宽W1/2 =2.355 峰高 一半处的峰宽称为半高峰宽。 峰底宽度W =4 =1.699W1/2 色谱峰两侧的拐点作切线， 在基线上的截距称为峰宽 第一节 色谱法基础 二、基本理论 1. 色谱分离过程 分配系数： 组分在固定相和流动相之间的分配平衡时的浓度之比。 CS为平衡时组分在固定相中的浓度； Cm为平衡时组分在流动相中的浓度 K:与组分、固定相、流动相的性质及温度有关。 第一节 色谱法基础 容量因子：达到分配平衡后，组分在固定相和流动相中的质量之比。 k: 与组分、固定相、流动相的性质及温度有关；与两相体积有关。 (k比K更易测定，常用k代替K) kA≠kB 是分离的先决条件 第一节 色谱法基础 色谱分离过程 是物质分子在相对运动的两相（固定相和流动相）间分配平衡的过程 混合物种两组份之所以能够分离，是因为两个组分的分配系数（K）或容量因子（κ）不等——被流动相携带移动的速度不等——差速迁移，从而被分离。 第一节 色谱法基础 2. 理论板数—塔板理论 色谱柱的理论板数越多，柱效越高；同样长度的色谱柱中的板高越小，理论板数越多，柱效越高。 第一节 色谱法基础 第一节 色谱法基础 3. 速率理论 第一节 色谱法基础 A：涡流扩散项——填充柱填充的不均匀而引起的峰扩张 解决方法：小粒度、颗粒均匀的固定相，均匀填充 毛细管气相色谱可忽略此项 B/u：纵向扩散项——流动相的浓度梯度引起的峰扩张 解决方法：使用粘度大的流动相，增大流速。 液相色谱可忽略此项 Cu:传质阻抗项——由于溶质在两项的分布不平衡造成的峰扩张 解决方法：小粒度、低粘度的流动相，提高柱温 第一节 色谱法基础 三、色谱法的分类 1. 按操作形式分类 薄层色谱（TLC） 气相色谱（GC） 高效液相色谱（HPLC） 电泳（CE） 第一节 色谱法基础 2. 按分离原理进行分类： 吸附色谱法： 利用被分离组分在吸附剂上的吸附能力不同，用溶剂或气体洗脱使组分分离。固定相：固体（吸附剂） 分配色谱法：利用被分离组分在两相中的溶解度差别所造成的分配系数的不同而被分离。固定相：液体 离子交换色谱法： 利用被分离组分在离子交换树脂上交换能力的不同使组分分离。 固定相：离子交换树脂 分子排阻色谱法： 利用被分离组分分子大小的不同导致在填料上渗透程度的不同使组分分离。固定相：多孔性填料 练习题 以固体吸附剂为固定相的HPLC按作用机制属于（ ） 。 A. 吸附色谱 B. 离子交换色谱 C. 胶柬色谱 D. 分子排阻色谱 E. 亲和色谱 答案：A 练习题 在色谱柱中，达到分配“平衡”后，组分在固定相(s)与流动相(m)中的质量(W)之比称为 A. 离解常数 B. 络合常数 C. 分配系数 D. 容量因子 E. 稳定常数 答案：D 第二节 薄层色谱法 重点： 1. 重点概念：比移植、分离效能 2. 常用固定相 薄层色谱法（thin layer chromatography，TLC）系将供试品溶液点样于涂布有固定相的薄层板上，经展开、 检视后所得的色谱图，与适宜的对照物按同法操作所得的色谱图进行比较，主要用于药品的鉴别或杂质检查。 第二节 薄层色谱法 一、操作方法 制板——点样——展开——定位——结果 1. 载板（基片） ：多为玻璃 2. 固定相 常用：硅胶、硅藻土、氧化铝、微晶纤维素、聚酰胺等（从分类上属于吸附色谱法） 3. 铺板