羊传染性脓疱病gif基因的克隆及序列分析.pdfVIP

摘 要 根据已发表的羊传染性脓疱病毒 NZ2 株的基因序列，应用计算机程序设计合成 一对针对羊传染性脓疱病毒 GIF 基因的特异性引物，对羊传染性脓疱病毒内蒙分离 株 OV-nm-05 进行 PCR 扩增，扩增产物与 pEASY—T1 载体连接，转化至感受态大肠 杆菌 DH5a 中，成功得到GIF 基因的阳性克隆，送测序公司进行测序得到该病毒GIF 的基因序列。该病毒 GIF 基因序列长约 1280bp 左右，其中包括 GIF 基因的编码区 和左右两边的非编码区。应用计算机软件将测定的基因序列及其推导的氨基酸序列 与 7 株参考毒株进行比较。 结果表明，内蒙古分离株 OV-nm-05 碱基序列与 OV-NZ2、OV-D1701、OV-IA82、 OV-SA00、OV-F07.808R、OV- MUK59/05、OV-F94.848R 的同源性分别为95.7%、98.2%、 96.7%、95.5%、95.9%、95.5%、95.1%；氨基酸序列同源性分别为 95.1%、90.2%、 95.1%、94.7%、94.7%、95.1%、93.6%。说明羊传染性脓疱内蒙古分离毒株OV-nm-05 的GIF 基因与 7 株参考毒株之间差异不大。 关键词： 羊传染性脓疱病毒；GIF 基因；PCR；克隆；序列分析 Cloning and sequence analysis of the GIF gene of Contagious Ecthyma virus Abstract A pair specific primer were designed and synthesized according to the published GIF(GM-CSF inhibitory factor) gene sequence of NZ2 strain of Contagious Ecthyma virus in Genbank. The GIF gene of the Inner Mongolia isolate starin(OV-nm-05) of Contagious Ecthyma virus was amplificated with the primer by PCR .It is cloned into pEASY-T1 plasmids and sequenced. The GIF gene sequence of OV-nm-05 strain was compared with 7 reference CEV strains. The result indicated that the GIF gene sequences homology of OV-nm-05 whith OV-NZ2 、V-D1701 、OV-IA82 、OV-SA00 、OV-F07.808R 、OV- MUK59/05 and OV-F94.848R was 95.7% 、 98.2% 、 96.7% 、 95.5% 、 95.9% 、 95.5% 、 95.1% respectively,and the GIF animo acid sequences homology was 95.1%、90.2%、95.1%、 94.7%、94.7%、95.1%、93.6% respectively.The results showed that OV-nm-05 strain had high homology with the 7 conference CEV strains. Keywords: Contagiosum ecthyma；PCR ；chcloning ；Sequence Analysis Directed by: prof. SHEN Zhiyi Applicant for Master degree: LU Yan (Master o