肉牛肌生成抑制成熟蛋白编码序列的克隆与原核表达.pdfVIP

中文摘要 肌生成抑制素是转化生长因子．B超家族中的一个成员，它是肌肉生长的负调控因子。通过 基因打靶技术获得的肌生成抑制素基因缺失鼠，其骨骼肌的数量呈现出明显而广泛的增加，而重 量是正常小鼠的2—3倍：MsTN主要在成年动物的骨骼肌中表达，它的缺失及敲除可以使肉牛具 有双肌表型，这种牛的骨骼肌重量较、。般品种大20％左右，而脂肪含量较低．肉质性状优馥。 因此Ms丁N基因已成为目前畜禽肉质性状的最主要标记基因。研究Ms丁N的结构、构建其原核 表达载体和功能，目的在于通过MslN基因的抗体或抑制剂与MsTN基因结合，灭活其功能， 安全高教地进行组织细胞营养代谢调控。对于提高肉用动物产肉量和瘦肉率，改善肉的品质，降 低饲养成本等具有非常重要的理论意义和实际应用价值。 本研究利用Trizol法，从肉牛的骨骼肌中提取总RNA。R1二PcR法扩增出MsTNcDNA户 性克隆。 从MsTNmRNA序列中设计引物上游5’端加＆ⅫHI酶切位点和起始密码子ATG，下 游5’端加鼬¨酶切位点和终止密码子TTA，TcA。以MsTNcDNA为模板，PcR扩增MsTN 连接，将连接产物转化入用Tss法制各的感受态细胞中，将转化菌涂布在含有x．gal、lPllG和 裂解法提取质粒，经PcR和酶切鉴定，结果表明，以肉牛肌肉细胞总础qA为模板，扩增出的 pMDl8．’r．MsTN克隆质粒，测序分析结果与设计一致。 插入原核表达载体DET28a(+)的丑口mHI和删I两酶切位点之间，转化后，挑选含有卡那霉 素的菌落进行培养，提取质粒进行PcR和酶切鉴定，并测序分析，构建了牛MsTN成熟蛋白编 子量约为43．4kDa，与理论分子量相符。 关键词：肉牛，肌生成抑制素，基因克隆， 原核表达 II and ofthe CloningProkaryoticExpressionCoding ofBeef SequenceMyostatin SheⅡbing-lei memberofthe been Myostatin，a transforminggrow【hf乱tor-psuperfhmily，has shovmtobeanegativcregul砒orofmyogenesis． mice showa ForaIlinstance，山e null myostatin generatedbygenetargeting in increaseinskel缸lmusclemass．hldividllalmuscles draInaticandwides_Dfead nullmice 3·foldmorethanthose is myostatin wei曲2一to of、vild—typemice．Myostatin skeletalmuscles．Canlesmutant in aIldadult developing possessing expressedspecmcally aUeles a‘dc九Jble characterizedextr℃meskeletaI myostatindisplay muscling’phenotypeby ofmus