莫尼茨属绦虫节间部分差异基因表达的研究.pdfVIP

摘要 本论文通过前期研究所构建的扩展莫尼茨绦虫基因的质粒文库，在表达量较大且节 片间表达差异显著的基因中克隆了5 个扩展莫尼茨绦虫功能基因进行研究。基因的质粒 文库编号分别为SSBR88,SSBR116,SSBR126,SSBR210 和SSBR614。基因克隆测序后获 得5 个基因的全长mRNA 序列，登录GenBank 并进行在线Blast 分析。GenBank 登录 号为GO254238-GO254242 。然后用生物信息学方法对基因进行分析并同时应用SYBR Green real-time PCR 检测方法探讨基因在莫尼茨属两种绦虫成虫的头节、幼节、成节、 孕节四个不同发育阶段组织的转录差异。最后对扩展莫尼茨绦虫孕节特有高表达的 SSBR88 类膜蛋白样基因通过构建表达载体进行蛋白质表达与初步分析。 序列分析结果表明我们成功获得了5 个基因的全长mRNA 序列，经BLastX 比对其 中SSBR116、SSBR210 分别和肝片吸虫的烯醇化酶和日本血吸虫的β微管蛋白的基因 最高相似度分别达74.8 ％和80 ％，推测这两个基因分别为扩展莫尼茨绦虫的烯醇化酶 和β微管蛋白基因。另外SSBR88,SSBR126,SSBR614 3 个基因与数据库中已有基因的相 似性比较低，推测为扩展莫尼茨绦虫特有基因，根据蛋白结构分别推断为扩展莫尼茨绦 虫的类膜蛋白样基因、类抗原蛋白样基因和类绒毛膜蛋白样基因。 实时定量RT-PCR 实验结果表明，5 个基因在两种虫体上的mRNA 表达差异趋势一 致。烯醇化酶(SSBR116)的mRNA 表达差异显著，其从高到低依次为成节、幼节、孕 节、和头节。烯醇化酶作为糖代谢的主要酶类，提示其在虫体寄生过程中进行胞内物质 代谢从而为生命活动提供能量起重要作用。β-微管蛋白(SSBR210)在成节的mRNA 表 达丰度最高，作为细胞微管结构和细胞分裂过程中纺锤体结构的基本组成成分，提示该 基因对维持莫尼茨绦虫的细胞形态与功能和细胞分裂以及配子形成等具有重要作用。未 知蛋白SSBR88 作为类膜蛋白样基因，生物信息学分析为分泌表达的跨膜蛋白，其 mRNA 在孕节的表达丰度最高，提示该蛋白可能在虫卵形成过程中与卵膜结构的形成 相关。另外，SSBR126 作为新的类抗原蛋白样基因，其也在孕节的mRNA 表达丰度最 高，它的作用还有待进一步的实验验证。SSBR614 在线分析和小鼠的绒毛膜有一定的 相似性，其在成节的mRNA 表达丰度最高，提示我们该基因与绦虫的雌性生殖器官某 个结构的生成有关。 本论文在构建扩展莫尼茨绦虫基因质粒文库的基础上，通过对其5 个差异表达基因 进行克隆和生物信息学分析，同时应用SYBR Green 实时定量PCR 技术检测基因在莫 尼茨属两个虫种的组织表达分布，为探索莫尼茨属绦虫生长发育的分子作用机制建立理 论基础。另外本文对扩展莫尼茨绦虫类膜蛋白样基因表达的研究，为以后对该基因生物 学功能的深入研究提供了参考。 关键词：莫尼茨属绦虫；mRNA 序列分析；mRNA 表达差异分析；类膜蛋白样基因原 核表达 II Abstract Five M. expansa’s genes were studyed that the expression abundance was large and had a significant differences in each stage which got through the gene plasmid library. Gene plasmid library numbers were SSBR88,SSBR116,SSBR126,SSBR210,SSBR614.We got five full length mRNA sequences after the genes were cloned and sequenced.After that we sent them on the GenBank,and analysed them with blast on line.GenBank accession number were GO254238-GO254242.Later genes were a