脂肪来源的间充干细胞体外转分化内皮细胞及褪黑素调控研究.pdfVIP

中国医学科学院北京协和医院硕士论文 摘要 stem ceIIs， 目的：人脂肪来源的间充质干细胞(humanadipose-der．vedm郎enchymaI hADscs)是一种具有很强的体外增殖能力和分化潜能的干细胞，因存在生物学特性 稳定、来源充足、易于体外培养等优势已引起各国学者的关注。本研究旨在：①建 立hADscs的原代培养体系，并在无血清培养基中将其转化为内皮细胞；②观察 hADSCs与聚￡．己内酯共聚物可降解材料的相容性，增长速率以及转分化为内皮细 胞的程度，为hADscs成血管的临床应用提供体外的研究依据；③观察褪黑素对 细胞内游离钙离子浓度以及ERK、p-ERK表达的变化，探索褪黑素对hADScs转分化 为内皮细胞的促进、血管形成及保护机制。 方法：从健康人体抽脂术获得的脂肪，利用本实验室建立的培养方法，进行hADscs 的原代培养，并用流式细胞术检测免疫表型和成骨和脂肪细胞分化实验检测其干细 表达抗原，透射电镜检测wP小体、成血管实验和DiI—Ac—LDL摄取实验来检测是否 m的聚￡一 分化为内皮细胞。将hADscs种植在孔径分别为60—80¨m和18m200IJ 己内酯共聚物材料上，计算接种率。用扫描电镜及免疫荧光标记发观察细胞在材料 上的分布及相容性，cCK．8法绘制增殖曲线。在材料进行hADsCs向内皮细胞分化实 moI／L)的MT作用于第三代hADscs 法检测FIk-1。选择不同浓度(10、1．o和o．1IJ 处理8d后，用流式细胞术检测vwF和vE．cadherin变化。用激光共聚焦显微镜检 测FIuo．3标记的细胞胞质内游离钙离子浓度(fca2+】I)变化。将不同浓度MT处理 24 blot技术 h的hADsc种植至MatrigeI胶上，观察细胞成血管能力。利用western 分析MT处理8d后hADSCs的ERK和p—ERK表达水平。 表明该细胞为人脂肪来源的间充质干细胞，并且可分化成骨成脂细胞。随着分化时 3 中国医学科学院北京协和医院硕士论文 的能力。②种植到材料上后，扫描电镜下观察细胞呈长梭形依附于多孔材料表面。 m孔径材料 60—80IJm孔径的材料细胞接种率为198．33±0．33)％，明显大于180．200IJ m孔径的材料进 上的细胞接种率(90．33±1．45)％；增殖曲线亦是如此。选择60．80U 表面均表达Flk．1。③10IJ vE．Cadherin(17．96±8．74)％较空白对照组的vwF和vE—Cadehr．n无显著性差异(P moI／L erin(21．13 0．05)；而1U moJ／L ±9．74)％，以及0．1IJ moI／L预处理24小时 (49．42±4．92)％，均明显高于空白对照组(P0．05)。40U 10、1．0和0．1IJmol／LMT处理8天后的细胞胞质内【Ca“】I较非MT分化8天组分别 MT 处理24 moI／LMT组hADSCs无