乳杆菌重组s-蛋白的纯化及各型fmdv表位嵌入效果的鉴定.pdf

本课题由国家自然科学基金(No．3136062)和内蒙古自然 1 科学基金(No．201BS0408)资助 This was fromtheNationalNatural studysupportedby，grants 136062)andInner ScienceFoundationofChina(No．3 Mongolia ofChina(No．2011 NaturalScienceFoundation BS0408) 摘 要 口蹄疫(Foot．and．Mouth Disease 给畜牧业带来巨大的经济损失。目前疫苗接种是控制FMD的最重要措施之一，常用 的疫苗是全病毒的灭活疫苗，灭活疫苗虽然在预防和控制FMD起着重要作用，但在 疫苗应用当中显出很多不足之处，如纯化病毒颗粒难度大，储存病毒颗粒条件苛刻， 疫苗接种后免疫效果不稳定等。目前，我国流行的FMD主要以A、O和AsiaI多型 交替出现，而且FMDV各型之间几乎无交叉免疫保护力，所以单价疫苗在免疫实践 中难以成效。 Purification GST-SLP和GST-SLP．MultiVPl融合蛋白，利用Pierce@GSTKit亲和层 Spin I 析和氯化锂沉淀法进行纯化并将纯化结果进行比较。采用各型FMDV如A、O和Asia 外经凝血酶切除GST标签蛋白质后，对SLP．MultiVP1蛋白质再进行表位识别试验。具 体研究结果如下： 组蛋白经SDS．PAGE和Western 的重组融合蛋白的存在，这与理论值相符。 Pudfication 2．利用Pierce@GST Kit亲和层析法和氯化锂沉淀的纯化方法， Spin 对两种重组融合蛋白进行纯化，获得了纯度较高的GST-SLP重组融合蛋白，但是重组 融合蛋白GST-SLP．MultiVPl的纯化效果不佳。 白质不影响重组蛋白质SLP的折叠，并各型FMDV表位可能位于重组蛋白质SLP的 表面。 本研究进一步为构建多价或联合表位肽疫苗载体及其免疫原性研究奠定了基础。 关键词：口蹄疫；重组融合蛋白；蛋白鉴定；蛋白纯化：表位识别 PurificationofRecombinantProteinofLactobacillusand S-layer the IdentificationofEmbeddedfrom FMDV EpitopesEach—type Abstract Foot—and-Mouth an and of Disease(FMD)isacute，febrilehighly disease contagious cloven—hoofedanimalswhich causedFoot—and—MouthDisease