口蹄疫灭活疫苗vp1基因分析方法的建立及应用.pdf

口蹄疫灭活疫苗中VPl基因分析方法的建立及应用 摘 要 应用口蹄疫灭活疫苗中加入酒精冻融离心破乳纯化抗原技术，对口蹄疫白油乳化 灭活疫苗病毒中的RNA进行提取，并与提取的制苗病毒、二乙烯亚胺灭活病毒的 软件包中的SepMan程序进行序列拼接，将所得序列进行同源性比较分析，结果显示 3种来源的VPl基因片段长度均为639bp，与预期目标相符，核苷酸序列显示，3种 方法处理的病毒VPl同源性为100％，说明灭活剂BEI和乳化工艺没有全部破坏口蹄 疫病毒VPl基因核酸。由此，建立了一种检测、分析口蹄疫灭活疫苗毒株VPl基因 的核酸序列的新方法。 通过以上建立的方法，对国内三个不同厂家的口蹄疫灭活疫苗中的VPI基因与国 内外口蹄疫病毒参考序列进行同源性、差异性比较分析，绘出遗传发育树图谱。结果 显示，有2个厂家疫苗O型病毒株为泛亚拓扑型，1个厂家为古典中国拓扑型。2个 泛亚拓扑型疫苗株之间的同源性为96．2％，他们与国际上流行毒株O／LY／2000、 性达94．498．4％，亲缘关系密切。 本实验建立了一种对口蹄疫成品疫苗中VPl基因提取和分析的实用方法，对于评 价口蹄疫疫苗毒株与流行毒株间的关系，为我国口蹄疫免疫预防提供有效可靠的疫苗 等方面，具有重要的实际意义。 关键词：口蹄疫病毒；灭活疫苗；RNA抽提方法；VPl基因；序列分析 onthe methodsestablishmentand ofVPl Study analysis application detectionfrominactivatedVaCClne foot··and--mouth gene against disease Abstract Emulsion todealinactivated Using breakingpurificationantigentechnology vaccines against Foot·and-Mouth and Disease，with VPlRNA alcohol，freezingthawingcentrifuging．Extractiongene fromwhiteoilemulsificationwithinactivatedvaccines virusandinactivated againstI研VlDV,live vaccine andused DNAStar BEI，RT-PCR of Software by amplified，cDNAsequencingSepMan package toconnectedthe resultsindicate RNAs from isolatedlive togethersequences．The that，VPl virus，virus inactivatedBEIandinactivatedvaccineemulsifiedwhiteoilaccesstoall by by