家蚕、野蚕染色结构变异的细胞生物学研究.pdf

家蚕、野蚕染色体结构变异的细胞生物学研究 摘要 ／ (、染色体是遗传物质的载体，是细胞生物学研究的重要组成部分。自1848 年Holmelster首先发现染色体以来，关于染色体的研究取得了许多重要的成 果，其研究成果有力地推动了细胞生物学的发展和进步a本论文应用细胞生物 学和分子生物学的方法，研究了家蚕、野蚕染色体畸变的结构特征，发现和确 认了可作为家蚕染色体缺失标志性状的“of”油蚕基因，并在减数分裂的偶线 期发现了染色体中间缺失的典型特征结构。发现了野蚕因受60Co-Y射线辐照 产生的染色体易位、缺失、倒位等变异结构，并从染色体变异角度探讨了辐射 不育机理，发现和克隆了与家蚕性连锁平衡致死基因l，、I。有关的DNA片段， 从基因产物及基因的表达、调控角度探讨了致死基因的作用和基因显、隐性互 作的机理。炷要的结果如下： 1．从系统保存的品种资源中发现一个中度油蚕突变种，经遗传实验和连锁 检索表明：该油蚕性状是受一对隐性突变基因控制，属于第21连锁群，座位在 为’of’。 2．“of”基因座位于实验遗传学证明的Lan缺失染色体区域，of油蚕与细长 蚕Lan杂交，凡表现油蚕形状的均为带有缺失的个体，利用of基因作为标志性 状，确保供试材料的正确。 显微观察发现了典型的中间缺失染色体特征结构(缺失圈)，从细胞学角度证明 了染色体缺失现象，根据缺失染色体显微测量，缺失圈长度占染色体总长的4．4— 6．1％。根据测量的染色体实际长度，结合土井良(1977)通过实验遗传学估算的 IU 约为总染色体i／8长度的一段区域，Lanky缺失为中间缺失。 4．采用Giemsa法研究了野蚕染色体的核型。野蚕染色体长度(偶线期在卜 31．t m之间)，变异范围小，在生物界属予小染色体类。 5．在250Gy(剂量率1．1Gy／min)”CoY射线辐照下，辐照当代仍能正常生长、 交尾、产卵，但辐照后的雌或雄与正常的雄或雌杂交产生的后代均表现为不育， 经对辐照当代的生殖细胞染色体进行显微观察，发现了缺失、易位、倒位等染色 体异常结构，据此判明染色体结构畸变是造成后代不育的主要原因。 6．对于Y射线辐照后的野蚕生殖细胞染色体显微观察发现了染色体断裂一重 接易位的细胞学证据。根据这一细胞学证据，关于野蚕染色体数地域差异的成因 推论认为：古野蚕染色体数n=28，在栖息进化过程中，日本等地的野蚕因某种环 境条件刺激，其中一条染色体发生断裂，大的断裂片段易位到非同源染色体后融 合形成一条大染色体，小的片段在遗传传递过程中丢失，致使染色体数n=27，其 后在进化演变过程中，该种群稳定遗传不断扩大延续至今，形成了中国和日本二 个地域野蚕亚种群。 7．应用RAPD法对带有性连锁平衡致死基因l。、l。的雌蚕进行了PCR扩增。 呈现多态性，即在w“1z11+。和W+n 段可作为性连锁平衡致死基因l，和l：的特有标记。 Data 8．将上述四个特异性片段亚克隆，测序后通过互联网向DDBJ(DNA Baseof 区域有90％的同源性，初步断定Zwall是一个与喋啶类化合物代谢有关的基因片 段；Zwa3片段与家蚕的Bml反转座因子的5’侧翼区域有93％同源性，据此断定 clone 5，l卫 星DNA片段和Mlleagrisgallopavo卫星DNA片段。 Ⅳ 9．根据Bml转座子的特点及性连锁平衡致死RAPD的结果，从本研究供试 学显隐性基因来看，二者间的主要差别在于+”基因(活)与l，基因(死)，W+nZ““2 (死)的基因组中出现与Bml转座因子高度同源的特异片段，但与喋啶化合物 代谢有关的基因特异片段却不存在：而W+nZ““2(活)的基因组中出现与喋啶 化合物代谢有关的基因的特异片段。假设：本实验克隆的喋啶代谢基因与1， 致死基因有关，Bml转座因子是产生l：致死作用的基因，据此推论：l：基因正 常表达时胚胎内喋啶化合物正常代谢，胚