硒对ch-ox致的大鼠血管损伤的保护作用及其机理研究.pdf

y578306 摘 要 研究表明低密度脂蛋白的氧化修饰是动脉粥样硬化(AS)发生的重要因素。氰 化修饰的脂蛋白中含有大量胆固醇氧化产物(Ch．Ox)。Ch—Ox存在于AS损伤处，而 且高胆圈醇血症的人和动物血浆中Ch—Ox含量都显著升高。Ox—LDL的细胞毒性丰要 来自Ch．Ox。然而对Ch，Ox的细胞毒性作用机理仍不十分清楚。 硒是一种重要的牛物微量营养元素，主要以硒酶、硒蛋白的形式存在于生物体内， 并通过SeCys残基上的硒氢基团的氧化还原特性，参与机体的抗氧化防御、细胞信号 转导、激素的调节等生命过程。流行病学及其他许多研究发现，硒的摄入量与AS和冠 心病的发生率之问存在负相关关系。血管内皮的氧化损伤被认为是AS发生的早期事件 之‘，在一定程度上预防AS的形成和发展，但对硒在血管中的作用机理尚未见到系统 的研究。 内皮氧化损伤的机理及补硒对m管内皮抗氧化防御能力的影响。主要包括以下内容： 护作用机制可能不同。 2、研究了长期缺硒状态下大鼠血管组织抗氧化能力的变化，并利用RT-PCR技 术进一步研究了GPx和TR两种硒酶mRNA表达情况。实验发现，长期硒摄入不足 会导致|衄管硒含量及血管GPx、SOD酶活性和总抗氧化能力显著降低，降低血管组织 抗氧化损伤的能力。缺硒减少GPx的mRNA表达进而引起酶活性降低。硒与血管疾 病之问的负相关关系可能与硒直接影响GPx的表达和活性有关。血管硒营养状态对血 管TR的调控不同于GPx：长期缺硒能引起大鼠血管组织TR的活性及mRNA表达增 加。提示血管组织可能存在一种通过ROS氧化还原调控TR表达和活性的机制。 尊瞧?弗霄、、一哮同意 笏垒文公布 ∥～ 3、ECV-304细胞是研究觎管内皮细胞的一利·适合的模型。通过MTT法、酶活 性测试、巯基含量、脂质过氧化水平测定和流式细胞仪检测研究了triol对ECV-304 发生氧化虑激，导致GPx、NOS酶活性升高，降低胞内巯基含量，增加细胞脂质过氧 化物水平，显著降低细胞存活率。但在本实验条件下没有观察到triol诱导ECV-304 细胞发生撼亡的现象。 巯攮含量，降低NOS酶活性，从而降低细胞脂质过氧化损伤，提高细胞存活率。但高 的模型化合物，能有效清除氢过氧化物，减少tri01日l起的细胞氧化应激，维持细胞内 GPx和NOS活性，提高胞内巯基含量，降低脂质过氧化损伤，提高细胞的存活率。 保护作用，反而随着EbselenN量的增加保护作用下降，这可能与二者之间的相互作用 有关。 胞膜流动性，增加LDH释放率；降低线粒体膜电位，提示triol的毒性作用不仅能引 的漏出，但两者的保护作用不完全一样：Na2Se03的浓度增大到一定范围后，保护作 用减弱；而在本文研究使用的浓度范围内，ebselen则呈剂量依赖性地抑制LDH的漏 对triol引起的线粒体损伤没有明显保护作用。这一结果提示triol引起的ROS主要来 为剂量依赖性的抑制作用；ebselen单独作用抑制率达50％，与GSH合用时表现出更 Lumin01．HRP体系低，这两种检测方法得到的结果比较一致：低剂量补硒抑制ROS II 定的出量效关系：但与Lumin01．HRP化学发光法测定的结果不同的是在GSH存在时， 增加。一部分02。被胞内SOD清除，产生H202和其他氢过氧化物，被GPx清除； 清除：当产生的ONOO一不能完全被清除时，其毒性作用导致细胞死亡。 结果表明，预先共培养4h后，讯能显著提高triol作用的细胞的存活率，其中25uM浓 度时细胞存活率与正常对照组基本相当。进‘一步的研究发现，Trx能,诱导细胞T-SOD 活性增加；有效清除H202和ONOO-等自由基，但对02‘的清除作用较弱：增加胞内巯 摹含量，从而减少细胞氧化应激的发生，使因氧化应激引起的GPx和NOS活性升高减 少，并显著降低细胞脂质过氧化损伤程度。Trx对triolgI起细胞线粒体跨膜电位降低没 有显著的抑制作州。 硒 ebselcn 关键词： 动脉粥样硬化 氧化型固醇tr