苜蓿小孢子发育期及游离培养技术的研究.pdfVIP

本文是 “新疆绿洲区优质牧草选育及生产 “十二五农村领域国家科技计划， 新疆牧草种质创新、新品种培育及草产业化研 的部分研究成果 课题主持人：张博教授 (新疆农业大学) 万方数据 苜蓿小孢子发育时期及游离培养技术的研究 摘要 游离小孢子培养是将花粉母细胞减数分裂后的四分体细胞进行单细胞离体培养的 技术。苜蓿为异花授粉植物，具有白交不亲和性，群体中个体的基因总；是处于杂合状态， 利用小孢子培养可以得到双单倍体(DH)植株，获得纯系。本试验研究了苜蓿小孢子 发育时期与花器形态的相关性；低温、蔗糖饥饿、甘露醇等预处理条件对苜蓿小孢子存 活率的影响；高温低温处理、培养基种类及成分、培养方法等因素对苜蓿小孢子产胚率 的影响；利用流式细胞仪技术对10份新疆野生苜蓿进行了倍性水平鉴定。研究结果如下： (1)紫花苜蓿和黄花苜蓿小孢子发育分为四个时期，分别为四分体时期、单核早 中期、单核靠边期、双核期，且各时期有明显的细胞学特征；花蕾纵径和花瓣长在小孢 子发育四个时期之间均表现极显著差异，其它花器形态指标只是部分时期之间差异显 著，因此花蕾纵径和花瓣长适宜作为小孢子发育时期的判断依据；紫花苜蓿和黄花苜蓿 小孢子处于单核靠边期时的花瓣微露出花萼，紫花苜蓿纵径长和花瓣长分别在 3．61．4．32mm矛I：12．68—3．61turn。 (2)紫花苜蓿花序预处理试验，采用B5液体培养基，4℃低温处理第1，2，3天小 孢子存活率显著高于25℃的对照处理，处理1d存活率最高，为51．23％，3d后明显下降； 培养基蔗糖饥饿处理后1d小孢子存活率为55．16％，显著高于对照；培养基不同浓度甘露 醇处理对小孢子存活率的提高作用不明显。紫花苜蓿花药预处理试验，采用B5固体培养 基，4℃低温处理、培养基蔗糖饥饿处理和不同浓度甘露醇处理对小孢子存活率的提高 作用不明显。 (3)紫花苜蓿游离小孢子的培养，将花序置于无蔗糖的B5液体培养基中4℃低温处 进行25℃常温暗培养。培养16．18d出现胚状体，产胚率为17．88个／皿。 (4)以新疆大叶紫花苜蓿和i得利紫花苜蓿为对照，利用流式细胞仪鉴定出来自 新疆的10份野生黄花苜蓿种质材料均为四倍体。 关键词：苜蓿；发育时期；游离小孢子培养；预处理；影响因素；倍性鉴定 万方数据 on Periodand Development StudyMicrospore Isolated CultureofAlfalfa Microspore Abstract cultureisa ofmonocellculrurein usestetrad Isolated technique vitro，which microspore cells．Alfalfaisa and derivedfromthemeiosisof mother cross—pollinatedplant pollen is inthe of technique self-incompatible，genotypealwaysheteroz