家蚕ap-4基与bmfez1基因的克隆及分析.pdfVIP

摘 要 果蝇的研究证明，胚胎发育的启动、体轴的建立等重要发育过程主要依靠母体来源的mRNA mori)作为鳞翅目昆虫的模式生物，-其早期胚胎发生 即母性基因的作用而实现。家蚕(Bombyx 与果蝇相比具有显著的差异性，研究家蚕的母性基因，对于了解家蚕胚胎发育的分子机制十分重 要，也将对鳞翅目昆虫的发育与种群的遗传控制技术研究提供参考。 本研究根据家蚕表达序列标签(EST)数据库，结合利用生物信息学技术和cDNA末端快速扩 所获得的序列进行开放阅读框、外显子和内含子分析，预测了蛋白的理化性质、保守结构域并进行 了分子进化分析。主要研究结论如下： 一、家蚕AP．．4(ActivatorProtein4)基因的克隆与分析 1．克隆获得了家蚕AP-4基因全长eDNA。长度为1621 bp，其中包括318bp的5’端非编码区 (5’LrrR)、993 bp的蛋白质编码区、终止密码子TGA和307bp的3’端非编码区(3’UTR)。ORF 从eDNA的319位起，在1314位终止，长度为996bp，编码331个氨基酸。 2．家蚕AP-4基因ORF位于家蚕基因组Ct9022100(GenBank 5674 bp之间。该基因由3个外显子和2个内含子组成，内含子长度分别为2763bp和481bp，3 个外显子分别位于cDNA的1～407位，408570位，5711621位。 castaneum)、蜜蜂(avismellifera)、家蚕、棉铃虫(Helicoverpaarmigera) 3．对赤拟谷盗(Tribolium 和人(Homo 表明该区域有很高的保守性，是一个典型的保守结构域，推测其在AP-4的生物学功能实现上起到 重要作用。对AP-4的分子进化分析表明，家蚕AP．4蛋白氨基酸序列与棉铃虫AP．4蛋白进化关系 最近，蛋白同源性达76％，分值为449，e值为4e．124。 4．利用实时定量RT-PCR技术分析了家蚕．4P4基因在不同发育时期的的表达水平。该基因在 所检测家蚕的各发育时期中，除蚁蚕和蛹期第4天未能检测到表达外，其它时期均有表达，其中幼 虫3龄和4龄期的表达量较高。推测家蚕AP-4基因可能是以一种短暂的、不连续的表达模式发挥 着调．1卜作用。 二、家蚕Bmfezl基因的克隆与分析 1．克隆获得了家蚕Bmfezl基因全长eDNA。长度为1823bp，其中包括184bp的5’端非编码 区(5’UTR)、1383 bp的蛋白质编码区、终止密码子耵执、228bp的3’端非编码区(3’UTR)和 25 bp的polyA尾。ORF从cDNA的185位起始，在1569位终止，长度为1386bp，编码461个氨 基酸。 2．家蚕Bmfezl基因由7个外显子和6个内含子组成，初步分析该基因覆盖了至少两个家蚕基 冈组Scaffold000276(GenBank No：CH380020．1)。 区域存在典型的亮氨酸拉链结构域fezl。家蚕Bmfezl基|天l编码蛋白的分子进化分析结果表明，家 caslaneum)肿瘤抑制因子2(tumor 蚕Bmfezl基因编码蛋白与推定的赤拟谷盗(Tribolium suppressor 4．根据其它物种Fezl蛋白功能的研究结果，推测家蚕未受精卵Bmfezl基因产物在家蚕胚胎发 育早期的细胞周期的调节、细胞微管的集合等方面发挥重要作用。 家蚕，彳P4， cDNA末端快速扩增，基因克隆 关键词 Bmfezl， Ⅱ Abstract The on thatthe suchastheformationof studyDrosophilaproves importantdevelopmen