家蚕后部丝腺蛋质组研究.pdfVIP

This was ProjectSuppoSed NationalNaturalScience by FoundationofChina mo 哮：重}后部丝腻j}自质姐茸}究 中文摘要 家蚕是重要的经济昆虫，也是模式实验昆虫，铸就了绚丽的古代文明，从古 到今在社会经济文化生活中占有重要的地位。家蚕丝素蛋白基因在时空上受到精 密的调控，仅高效专一地在后部丝腺中表达，同时在家蚕幼虫期，丝素基因限于 食桑期表达，而在眠中处于关闭状态。家蚕丝素基因的表达决定了后部丝腺细胞 分泌特异性的功能蛋白质。在后基因时代，功能基因组学成为研究的重点，蛋白 质组是研究基因功能的重要方法，开展家蚕后部丝腺蛋白质组研究，一方面能高 效利用家蚕作为生物反应器高效地生产蚕丝和其他有价值的蛋白质，另一方面也 能为细胞静息和增殖的周期性转换、细胞的分化和凋亡及其调控机理的阐明提供 有力的佐证。 本研究通过对家蚕后部丝腺细胞蛋白质进行双向电泳分离和图像分析，从整 体水平研究了家蚕后部丝腺细胞蛋白的构成，从分子水平揭示了后部丝腺细胞蛋 白在五龄期的整体变化。 本研究通过对家蚕4眠期和5龄期后部丝腺细胞的蛋白质双向电泳图谱的比 较分析，发现在家蚕4眠期后部丝腺细胞的蛋白质双向电泳图谱中，共检测到蛋 白质斑点425个。对5龄期后部丝腺细胞不同发育时期蛋白质图谱比较分析得知， 随着生长发育的进程，不断地出现一些特异的蛋白斑点；在4眠期存在的蛋白斑 点，在5龄期基本不消失；5龄期新出现的蛋白斑点也基本保存稳定。这些现象说 明不同的发育时期，后部丝腺细胞的蛋白质组成是不一致的。这些特异蛋白斑点 可能与后部丝腺细胞的生理生化反应相对应。推测5龄前、中期(第l、5天)新 增加的蛋白斑点可能与丝素蛋白的合成、分泌有关，而5龄后期(第9天)新增 加的蛋白斑点可能与丝腺组织的形态变化、细胞的分解凋亡有关。 第四天后部丝腺细胞的蛋白质双向电泳图谱的比较分析，发现各个品种五龄第一 天与第四天后部丝腺细胞的蛋白质组成均存在差异，差异随品种的不同而不同。 E8第四天比第一天多出2个点，并且有5个点的含量明显高于第一天；四海第四天 比第一天多出2个点，并有1个点的含量明显高于第一天，另外有一个点的含量低 于第一天：301第四天比第一天多出2个点，并且1个点的含量高于第一天，lO个点 只在第一天检测到，8个点的含量低于第一天。兰lO第四天比第一天多出7个点，9 章l后部兰臁蛋白ⅢqH究 个点的含量高于第一天，2j个点只在第一天检测到，1个点的含量低于第一天。丝 胶茧第一天比第四天多出3个点，并且13个点的含量明显高于第四天。推测高、中 ●’ 可能与细胞分泌丝素蛋白的能力有关；丝胶茧在第四天消失及含量降低的蛋白质 斑点可能与协助重链与轻链通过二硫键结合有关，也可能与丝胶茧蚕品种不合成 丝素蛋白有关。对这些差异所涉及的蛋白质进行序列、功能分析，将有利于了解 这些蛋白在丝素分泌过程中的生理功能，从而深入了解这些代谢差异与细胞分泌 丝素能力的关系，为选育高产的品种提供理论依据。 关键词：家蚕；后部丝腺；蛋白质电泳；图像分析 gm-后部兰臁蛋白赍4工牙究 第一部分文献综述 第一章蛋白质组学及其发展现状 20世纪中期以来，随着Watson和Crick 信息载体DNA和生命功能的主要体现者蛋白质的研究，成为生命科学研究的主要 内容。目前，生物学家们的研究重心已经从揭示生命的所有遗传信息转移到在整 体水平上对生物功能的研究。90年代中期，在人类基因组计划研究发展及功能基 因组学的基础上，国际上萌发产生了一门在整体水平上研究细胞内蛋白质的组成 为研究对象。 1．1蛋白质组的概念 SmithI实验室与williams等4家实验室合作，对至今已知的自我复制生物 Mycoplasmagenitalium进行蛋白质成分的大规模分离与鉴定，蛋白质组 志上，指基因组编码的全部蛋白质及其存在方式，是一个基因组、一种生物或一 et 个细胞、组织所表达的全部蛋白质成份(Wasing