成年公兔生精细和支持细胞的纯化及体外培养.pdfVIP

成年公免生精细胞和支持细胞的纯化及体外培养 研究生：邹海军 导师：王杏龙教授 扬州大学动物科学与技术学院 中文摘要 为了研究生精细胞和支持细胞在体外的生长特性、形态特征以及这两种细胞 之间的相互关系，本实验以成年公兔的睾丸为实验材料，采用不同的酶处理方法 对睾丸精细管进行消化，然后利用低渗液进行处理和选择性贴壁培养，对支持细 密度梯度离心和选择性贴壁培养的方法，对生精细胞进行纯化；最后，将纯化的 生精细胞单独培养，同时还将纯化的生精细胞与支持细胞进行共培养。结果如下： l 采用两种消化方法，均能得至Ⅱ单细胞悬液，并且单个睾丸所获细胞总数分别 (P0，05)；就细胞存活率而言，两者差异显著(95．28％vs 2 mM 利用20 处理前相比，差异显著(23．31％VS 95．96％，P0．01)。 与处理前相比差异极显著(80．98％VS 3 将低渗处理后的支持细胞悬液和未经处理的细胞悬液都进行选择性贴壁培 养，结果表明，两种细胞悬液中的支持细胞比率都显著升高。经低渗处理的 细胞悬液培养后与培养前相比，支持细胞的比率二者间差异极显著(76．01％ VS 80．89％， 16．01％，PO，05)，而细胞存活率有所下降， 前相比差异显著(42．86％VS 但差异不显著(90．48％VS 42．86％， 养后的支持细胞比率进行比较发现，二者间差异极显著(76．01％VS PO．01)。 25％一35％梯度带，其中主要含有生精细胞和支持细胞，它们的比率分别为 带细胞经选择性贴壁培养后，生精细胞比率达到94．37％，其中还含有5．13％ 未成熟的精细胞。 5 纯化的生精细胞单独培养，细胞不能贴壁和增殖，培养4天后，几乎全部死 亡：而与支持细胞共培养2天后，细胞开始增殖，7天后达到增殖高峰，两 周后，细胞死亡。 关键词：公兔：生精细胞；支持细胞；纯化：培养 VitroCultureof Purificationand／n Rabbits andSertoliCellsonAdult Cells Zou M．S．Candidate：Haijun Advisor：Prof．XinglongWang and ofAnimalScience College Technology，Yangzhou Abstract the andthe Inorderto characteristic，cell studygrowth morphologic wereusedasmaterial of cellsandSertoli malerabbits、testis s