犬β干扰素的基克隆、原核表达及活性测定.pdfVIP

犬p干扰素的基因克隆、原核表达及活性测定 研究生：谭明芬 导师：孙怀昌教授 摘 要 随着社会进步和人民生活方式的改变，犬作为伴侣动物已成为人们生活 的一部分。犬细小病毒病、犬瘟热、犬腺病毒感染病毒病严重危害养犬业的 发展，目前无有效的治疗药物，主要用疫苗接种进行预防，但免疫效果欠佳。 白，具有广谱抗病毒和增强免疫作用，可用于犬病毒病的治疗。目前临床上 使用的主要是重组大肠杆菌表达的0【干扰素，不仅抗病毒谱受到一定限制， 而且纯化过程复杂，生产成本较高。为了增强干扰素对犬病毒病的治疗效果 和降低生产成本，本研究将弹性蛋白样多肽(Elastin．1ike ．蛋白内含肽(intein)介导的新型大肠杆菌表达系统，用于犬p干扰素的表 达与纯化，现将研究结果报告如下： 1从比格犬耳皮肤组织中提取基因组DNA为模板，通过PCR扩增出犬 B干扰素成熟肽编码序列，将扩增产物克隆于质粒载体并进行测序，结果显 示与GeneBnak上公布的犬B干扰素基因同源性为100％。 pET-MIE原核表达载体，将重组表达载体转入大肠杆菌，用温敏诱导法诱导 重组菌表达，经SDS．PAGE分析证明，表达的重组