猪肺炎支原体膜白免疫亲和层析及elisa检测方法的建立.pdfVIP

摘 要 PneumoniaeofSwine，MPS)是由猪肺炎支原体 猪支原体肺炎(Mycoplasma (Mycoplasma 呼吸道传染病。主要症状及表现为咳嗽、气喘、饲料的利用率低，病猪生长十分缓慢， 甚至生长停滞。该病以发病率高，死亡率低为其特点。而在临床上检测感染猪，仍面 临困难。猪肺炎支原体的表面膜蛋白是该菌主要的免疫抗原，对猪肺炎支原体感染的 诊断有重要意义。 本研究通过制备抗猪肺炎支原体高免血清，运用辛酸．硫酸铵盐析和阴离子交换 层析技术，获得高活性、高电泳纯的IgG。再将纯化IgG与CNBr·activatedSepharose 的支原体细胞所获得的猪肺炎支原体膜蛋白。纯化的膜蛋白抗原经SDS．PAGE电泳 分析，结果显示，纯化后的抗原蛋白分子的纯度显著提高，仅呈现66KD，48KD，46KD， 子量范围在20KD．100KD之间。 本研究采用纯化的膜蛋白抗原建立了猪肺炎支原体的间接ELISA检测方法。试 验确定的最适ELISA工作条件为：包被纯化抗原蛋白浓度5ug／ml，血清稀释度为1：80， (1：1000稀释)作用时间为60min，阴阳性界限OD值为0．289。 分别用纯化